紫花苜蓿MsPOD基因的克隆及對(duì)擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、本研究以紫花苜蓿“中苜一號(hào)”作為試驗(yàn)材料，利用同源克隆技術(shù)，得到了紫花苜蓿過氧化物酶基因MsPODcDNA全長(zhǎng)，然后構(gòu)建了植物表達(dá)載體，最終用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)化入擬南芥中，為進(jìn)一步研究該基因的作用機(jī)制有著推進(jìn)作用，也為研究該基因遺傳轉(zhuǎn)化對(duì)植物抗脅迫能力的提升奠定了良好的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果如下：
　　1、通過RT-PCR的方法從紫花苜蓿中克隆得到了MsPOD基因，通過對(duì)該基因的生物信息學(xué)分析得出，該基因的完整開放

2、閱讀框長(zhǎng)1062bp，并編碼353個(gè)氨基酸殘基；對(duì)該基因的同源性及進(jìn)化樹分析得出，該基因與其他植物的過氧化物酶基因有著相當(dāng)高的同源性，共同屬于植物III類過氧化物酶基因大家族，并隸屬于分泌型過氧化物酶。
　　2、通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法分析了MsPOD基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，MsPOD基因在莖中表達(dá)量最高，而在根中表達(dá)最弱；結(jié)果表明，該基因的表達(dá)量在不同的處理時(shí)間段有著較為明顯的差異，而且在不同的脅迫條件下，該基

3、因有著其特有的表達(dá)形式，特別是在H2O2及 NaCl處理?xiàng)l件下，基因的表達(dá)量有較為明顯的上升。因而MsPOD基因共同受H2O2和鹽的誘導(dǎo)表達(dá)。
　　3、將克隆得到的MsPOD基因的完整CDS序列插入到pBI121中，從而構(gòu)建出植物超表達(dá)載體pBI-POD，并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將表達(dá)載體pBI-POD導(dǎo)入到擬南芥中，最終獲得了13株卡納霉素抗性苗，后經(jīng)PCR及RT-PCR檢測(cè)后，其中3株擬南芥苗呈陽性，對(duì)呈陽性的擬南芥植株進(jìn)行GUS