農(nóng)桿菌介導(dǎo)的AtPCS1基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究.pdf

1、利用植物修復(fù)重金屬污染的土壤是一種廉價可行的修復(fù)技術(shù)。大部分已發(fā)現(xiàn)的重金屬超富集植物生物量小，限制了其在植物修復(fù)方面的應(yīng)用。本實驗借助基因工程的手段將重金屬富集耐受相關(guān)的基因AtPCS1轉(zhuǎn)入生物量大適應(yīng)性廣的苜蓿中，以期獲得能富集重金屬的苜蓿，為今后的工作提供基礎(chǔ)材料。 首先，比較了隴東、甘農(nóng)三號、阿爾崗金、三得利、金皇后等9種基因型苜蓿的子葉和胚軸在不同培養(yǎng)基上的愈傷形成及分化能力。研究結(jié)果表明：子葉的再生能力較胚軸強(qiáng)；隴東和

2、甘農(nóng)一號是9種苜蓿中2種分化能力最強(qiáng)的基因型，其子葉愈傷形成率分別為85.0％和90.0％，分化率均為55.0％；本實驗所設(shè)置的F和G培養(yǎng)基分別是子葉和胚軸愈傷形成及分化的最佳培養(yǎng)基。進(jìn)一步比較了隴東和甘農(nóng)一號的葉片、胚軸、子葉、莖節(jié)和子葉節(jié)等不同外植體的分化再生能力，莖節(jié)和子葉節(jié)在G培養(yǎng)基上可以直接分化出苗，以子葉起源的外植體較胚軸和葉片起源的外植體分化時間短且叢生芽形成數(shù)量高。再生芽可在原培養(yǎng)基上直接分化出苗并在蔗糖濃度為10mg/

3、L的1/2MS培養(yǎng)基上生根。 然后，用植物表達(dá)載體pBI121-AtPCS1轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，經(jīng)菌落PCR鑒定獲得陽性菌，通過葉盤法以重組的農(nóng)桿菌侵染隴東和甘農(nóng)一號不同的外植體，通過GUS組織化學(xué)染色及對抗性愈傷的形成率進(jìn)行分析表明，子葉是適合轉(zhuǎn)化的最佳外植體；隴東和甘農(nóng)一號苜蓿的轉(zhuǎn)化效率無顯著差異；真空處理可以提高轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化后的外植體在含有卡那霉素和羧芐青霉素的F培養(yǎng)基上分化出芽，在1/2Ms培養(yǎng)基上生根。