農(nóng)桿菌介導(dǎo)的AtPCS1基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究.pdf

1、利用植物修復(fù)重金屬污染的土壤是一種廉價(jià)可行的修復(fù)技術(shù)。大部分已發(fā)現(xiàn)的重金屬超富集植物生物量小，限制了其在植物修復(fù)方面的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)借助基因工程的手段將重金屬富集耐受相關(guān)的基因AtPCS1轉(zhuǎn)入生物量大適應(yīng)性廣的苜蓿中，以期獲得能富集重金屬的苜蓿，為今后的工作提供基礎(chǔ)材料。 首先，比較了隴東、甘農(nóng)三號(hào)、阿爾崗金、三得利、金皇后等9種基因型苜蓿的子葉和胚軸在不同培養(yǎng)基上的愈傷形成及分化能力。研究結(jié)果表明：子葉的再生能力較胚軸強(qiáng)；隴東和

2、甘農(nóng)一號(hào)是9種苜蓿中2種分化能力最強(qiáng)的基因型，其子葉愈傷形成率分別為85.0％和90.0％，分化率均為55.0％；本實(shí)驗(yàn)所設(shè)置的F和G培養(yǎng)基分別是子葉和胚軸愈傷形成及分化的最佳培養(yǎng)基。進(jìn)一步比較了隴東和甘農(nóng)一號(hào)的葉片、胚軸、子葉、莖節(jié)和子葉節(jié)等不同外植體的分化再生能力，莖節(jié)和子葉節(jié)在G培養(yǎng)基上可以直接分化出苗，以子葉起源的外植體較胚軸和葉片起源的外植體分化時(shí)間短且叢生芽形成數(shù)量高。再生芽可在原培養(yǎng)基上直接分化出苗并在蔗糖濃度為10mg/

3、L的1/2MS培養(yǎng)基上生根。 然后，用植物表達(dá)載體pBI121-AtPCS1轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，經(jīng)菌落PCR鑒定獲得陽(yáng)性菌，通過(guò)葉盤法以重組的農(nóng)桿菌侵染隴東和甘農(nóng)一號(hào)不同的外植體，通過(guò)GUS組織化學(xué)染色及對(duì)抗性愈傷的形成率進(jìn)行分析表明，子葉是適合轉(zhuǎn)化的最佳外植體；隴東和甘農(nóng)一號(hào)苜蓿的轉(zhuǎn)化效率無(wú)顯著差異；真空處理可以提高轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化后的外植體在含有卡那霉素和羧芐青霉素的F培養(yǎng)基上分化出芽，在1/2Ms培養(yǎng)基上生根。