日本血吸蟲Sj23基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的初步研究.pdf

1、血吸蟲病是一種世界性的寄生蟲傳染性疾病，對人類及家畜的健康安全具有極大的威脅，血吸蟲疫苗的研制具有重大的經(jīng)濟(jì)價值及社會意義。轉(zhuǎn)基因植物疫苗是近年來發(fā)展起來的一種新技術(shù)，因其具有廉價、安全、有效等優(yōu)點，已成為當(dāng)今疫苗研究領(lǐng)域的熱點。紫花苜蓿是全世界應(yīng)用最廣泛的一種豆科牧草，具有較高的營養(yǎng)價值和成熟的遺傳操作經(jīng)驗。為了開發(fā)血吸蟲轉(zhuǎn)基因植物疫苗，本研究將Sj23轉(zhuǎn)化紫花苜蓿，并進(jìn)行DNA 及表達(dá)水平的檢測，取得的主要成果如下： 1.

2、擴(kuò)增日本血吸蟲Sj23基因，經(jīng)TA 克隆和測序驗證后，插入pCAMBIA1303的多克隆位點，構(gòu)建真核表達(dá)載體pCAMBIA1303-Sj23。 2. 以紫花苜蓿為材料，通過根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404 介導(dǎo)，將Sj23 對紫花苜蓿進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。采用2 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L KT的激素組合在MS 培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，獲得96％的出愈率。再使用50 mg/L的H