玉米ZmCKX1基因的表達分析和遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、細胞分裂素是植物生長過程中的一類重要激素，細胞分裂素氧化酶通過移除細胞分裂素的N6-異戊二烯鏈產(chǎn)生一個腺嘌呤和一個相應(yīng)的不飽和的乙醛-3-甲基-2-丁烯醛，不可逆的降解細胞分裂素而調(diào)控植物的生長發(fā)育。本文根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫中OsCKX2的基因序列設(shè)計引物，利用RT-PCR技術(shù)克隆得到從玉米自交系鄭58中克隆了編碼細胞分裂素氧化酶1(ZmCKX1)的基因。選取授粉前后不同時間點的玉米自交系及其雜交后代的雌、雄穗，通過熒光定量PCR方

2、法，分析ZmCKX1基因的表達分析。并構(gòu)建了ZmCKX1基因的過表達和RNA干擾載體，進行了玉米幼胚的遺傳轉(zhuǎn)化，主要研究結(jié)果如下：
　　1、ZmCKX1基因閱讀框全長為1608 bp，編碼535個氨基酸，蛋白質(zhì)分子量為57 kd，理論等電點pI=5.22。該基因與TaCKX1，AtCKX在核苷酸水平上同源性分別為69％和49％。
　　2、ZmCKX1基因主要表達在雌穗中，并且隨著授粉時間的延長，ZmCKX1在雌穗中的表達量逐

3、漸升高，在授粉后30 d達到最高，是雌穗10 d的5倍，雌穗0 d的50倍。并且雜交種中ZmCKX1的表達量明顯低于親本，ZmCKX1的表達分析表明：產(chǎn)量越高，ZmCKX1表達量越低。這表明ZmCKX1的表達水平與玉米的生長活力及產(chǎn)量是負相關(guān)的。
　　3、通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ZmCKX1基因的過表達和RNA干擾載體轉(zhuǎn)化500個玉米幼胚，利用抗性基因Hpt和目的基因PCR檢測再生的小苗，結(jié)果表明，ZmCKX1已經(jīng)插入到了植物基因組中，