黃連素對(duì)肉雞P-gp和CYP3A mRNA表達(dá)及其對(duì)口服恩諾沙星藥動(dòng)學(xué)的影響.pdf

1、P-糖蛋白是Abcb1基因編碼的一種ATP依賴性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。在腫瘤細(xì)胞和機(jī)體正常組織中均有分布，是造成腫瘤細(xì)胞耐藥及動(dòng)物口服藥物生物利用度差異的重要原因。CYP3A作為一種重要的Ⅰ相藥物代謝酶，臨床中60％以上的藥物都通過CYP3A代謝，其活性高低是造成藥物間相互作用的重要原因。近年來，篩選開發(fā)低毒有效的P-gp抑制劑以提高口服藥物生物利用度和逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥已成為研究的熱點(diǎn)。中藥黃連素(Berberine)主要成分為小檗堿，具有

2、抗菌譜廣、綠色天然等優(yōu)點(diǎn)，是常用的抗感染治療藥物。目前，有研究發(fā)現(xiàn)黃連素對(duì)大鼠P-gp表達(dá)和活性具有一定影響，但黃連素對(duì)農(nóng)場動(dòng)物家禽P-gp的表達(dá)及對(duì)口服藥物的影響尚未見報(bào)道，有待進(jìn)一步研究。本論文以此為切入點(diǎn)，研究了不同劑量黃連素對(duì)內(nèi)雞肝臟、腎臟和腸道組織中Abcb1 mRNA表達(dá)及對(duì)口服恩諾沙的星藥動(dòng)學(xué)影響，為獸醫(yī)臨床合理用藥以及P-gp抑制劑的篩選提供參考。
　　首先，本實(shí)驗(yàn)采用RT-PCR方法探究黃連素不同劑量(40和80

3、 mg/kg)與灌服不同時(shí)間（1，3和10天）后對(duì)肉雞Abcb1和CYP3A mRNA表達(dá)的影響。比較肉雞不同組織中Abcb1 mRNA的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，其在回腸組織中的表達(dá)量最高，且黃連素處理后對(duì)肝臟、空腸及回腸Abcb1 mRNA表達(dá)的影響較為顯著。與對(duì)照組相比，黃連素處理對(duì)肝臟Abcb1 mRNA表達(dá)具有一定的誘導(dǎo)作用，其中低劑量的黃連素連續(xù)處理3天對(duì)肉雞肝臟的誘導(dǎo)作用顯著（P=0.029）;黃連素對(duì)腎臟及腸道組織Abcb1 mRNA

4、表達(dá)具有不同程度的抑制作用，尤其黃連素處理1天后，對(duì)肉雞十二指腸（P=0.036，P=0.008）、空腸（P=0.086）、回腸（P=0.026，P=0.003）和腎臟（P=0.021，P=0.003）Abcb1 mRNA表達(dá)均呈顯著抑制作用。黃連素處理后對(duì)內(nèi)雞肝臟、腎臟CYP3A37mRNA表達(dá)影響不顯著（P＞0.05）;但經(jīng)黃連素短時(shí)間（1、3天）處理后對(duì)十二指腸（P=0.018，P=0.003）、空腸（P=0.032，P=0.01

5、2）和回腸（P=0.016，P=0.014）組織中CYP3A37 mRNA表達(dá)有明顯的抑制作用。對(duì)不同處理組肉雞CXR mRNA檢測結(jié)果顯示:黃連素高、低劑量處理1天后均能顯著抑制十二指腸(P=0.039，P=0.031)、空腸（P=0.030，P=0.034）和回腸（P=0.015，P=0.012）組織中CXR mRNA的表達(dá);高、低劑量黃連素處理肉雞3天后對(duì)肝臟CXR mRNA表達(dá)水平有一定的誘導(dǎo)作用（P=0.021，P=0.038

6、），CXR mRNA表達(dá)變化與Abcb1 mRNA表達(dá)變化呈現(xiàn)一定的相關(guān)性。
　　其次，為進(jìn)一步探討黃連素對(duì)Abcb1 mRNA表達(dá)的影響，我們以Caco-2細(xì)胞為研究對(duì)象，測定不同濃度黃連素對(duì)Caco-2細(xì)胞內(nèi)Abcb1 mRNA表達(dá)的影響。首先采用MTT法測定對(duì)Caco-2細(xì)胞處理24 h的細(xì)胞毒性作用，并根據(jù)MTT試驗(yàn)結(jié)果選用20和40μM的黃連素處理Caco-2細(xì)胞后于不同時(shí)間點(diǎn)采集細(xì)胞樣品檢測Abcb1mRNA的表達(dá)水平

7、，結(jié)果表明:黃連素濃度低于200μM時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長率沒有影響，當(dāng)黃連素濃度大于200μM時(shí)能夠顯著抑制細(xì)胞的生長。低濃度黃連素處理較短時(shí)間（2、4和8h）可顯著抑制Abcb1 mRNA的表達(dá)，但隨處理時(shí)間延長至16h以上時(shí)，其影響作用不顯著;高濃度黃連素對(duì)Caco-2細(xì)胞Abcb1 mRNA表達(dá)的影響與黃連素低濃度時(shí)相似，同樣在黃連素處理時(shí)間較短時(shí)能夠顯著抑制細(xì)胞Abcb1 mRNA的表達(dá)，處理時(shí)間較長時(shí)抑制作用不明顯。
　　基于

8、黃連素對(duì)Abcb1 mRNA表達(dá)的影響，本論文進(jìn)一步探討了不同劑量的黃連素對(duì)肉雞口服恩諾沙星藥動(dòng)學(xué)的影響。結(jié)果顯示:單劑量口服恩諾沙星后其在肉雞體內(nèi)的吸收速率常數(shù)(ka)為0.96±0.25，消除半衰期（T1/2ke）為4.19±0.26 h，達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)為2.66±0.45 h，血漿中藥物峰濃度（Cmax）為2.28±0.12μg/mL，藥時(shí)曲線下面積（AUC0-∝及AUC0-2h）分別為21.78±1.59和5.30±0.

9、45(μg/mL)*h;經(jīng)黃連素高、低劑量處理1天可明顯促進(jìn)恩諾沙星在肉雞體內(nèi)的吸收，表現(xiàn)為Ka（1.66±0.17、1.78±0.18,P＜0.05），AUC0-∝(28.04±0.54、29.80±1.68,P＜0.05),AUC0-2h(7.07±0.36、7.60±0.58，P＜0.05)及T1/2ke（5.87±0.48、7.57±1.46，P＜0.05）都顯著升高，達(dá)峰時(shí)間（2.13±0.18、1.78±0.18）雖有所提前