P-gp及CYP3A誘導(dǎo)劑地塞米松解除中樞抑制藥物阿米替林中毒的機制研究.pdf

1、一、目的 從上調(diào)mdr1基因誘導(dǎo)血腦屏障上P-gp的外向轉(zhuǎn)運和上調(diào)CYP3A基因誘導(dǎo)肝藥酶以加速體循環(huán)代謝兩個途徑研究中樞抑制藥物阿米替林中毒的解毒機制。 在體內(nèi)考察預(yù)先給予不同劑量及時長的地塞米松后對大鼠阿米替林代謝動力學(xué)的影響和腦-血藥物濃度比值；并測定大鼠腦組織及肝中CYP3A2和P-gp編碼基因的表達水平，以探討其影響機制。 二、方法 1.給藥及采樣 1.1選用清潔級健康成年雄性wista

2、r大鼠（250-300g）40只，按完全隨機分組設(shè)計，分為八組，每組5只。分別連續(xù)腹腔注射玉米油4天（Ka組）、地塞米松玉米油溶液（1mg·kg-1）2天（2La組）、地塞米松玉米油溶液（1mg·kg-1）4天（4La組）、地塞米松玉米油溶液（5mg·kg-1）2天（2Ma組）、地塞米松玉米油溶液（5mg·kg-1）4天（4Ma組）、地塞米松玉米油溶液（25mg·kg-1）2天（2Ha組）、地塞米松玉米油溶液（25mg·kg-1）4天（

3、4Ha組）和維拉帕米生理鹽水溶液（8 mg·kg-1）注射阿米替林1小時前（Ⅰ組），每只于靜脈注射阿米替林后5，10，30，60，120，200，300和400 min眼眶后靜脈叢取血。采血完畢后將各組大鼠處死，快速取肝臟組織和大腦組織，置液氮中保存。 1.2選用清潔級健康成年雄性wistar大鼠40只按完全隨機分組設(shè)計，每組4只，分為十組。Kb、2Lb、4Lb、2Mb、4Mb、2Hb、4Hb組前處理方法分別與Ka、2La、4L

4、a、2Ma、4Ma、2Ha、4Ha相同；4LI組、4MI組和4HI組為4Lb、4Mb、4Hb組大鼠阿米替林給藥前1小時腹腔注射維拉帕米生理鹽酸溶液（8mg·kg-1）。每只于靜脈注射阿米替林1h后，斷頭處死。收集血液和腦組織。 2.生物樣品測定方法 2.1采用HPLC-MS測定血漿和1.2中取出的腦組織中阿米替林及其活性代謝物去甲替林的濃度。 2.2采用RT-PCR測1.1腦和肝組織中mdrla及CYP3A2表達

5、水平。 三、結(jié)果 1.生物樣本中藥物濃度的測定結(jié)果 用HPLC-MS法測定阿米替林及其活性代謝物NOR的濃度。在血漿中，AMI和NOR分別在10～3200ng.mL-1和10～1000ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好。在腦組織勻漿液中AMI，NOR分別在25～2000ng·mL-1和1.5～100ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好。方法回收率均在89％～114％范圍內(nèi)，日間和日內(nèi)精密度均<12％。 2.大鼠

6、靜脈注射阿米替林藥代動力學(xué)及腦/血漿藥物濃度比 2.1各地塞米松處理組的AMI曲線下面積（AUC0→∞）、平均滯留時間（MRT）和清除率（CLtot）均低于空白組；但維拉帕米抑制劑組大鼠的AMI藥動學(xué)參數(shù)與空白組相比，無顯著性差異。 2.2各地塞米松給藥組與空白組大鼠的NOR曲線下面積（AUC0→∞）和峰濃度（Cmax）無顯著性差異，但抑制劑組大鼠的此二者參數(shù)均大于地塞米松給藥組和空白組。 2.3各地塞米松給藥組

7、大鼠的腦/血AMI和NOR濃度比值均低于空白組。但在驗證組（LI，MI，H）中給予P-gp抑制劑維拉帕米后仍未能逆轉(zhuǎn)AMI和NOR在大鼠腦部的減少，分別與4Lb，4Mb，4Hb組比較無顯著性差異。 3.各組大鼠腦和肝組織中mdrla及CYP3A2的表達水平 3.1隨著地塞米松給藥劑量的加大和用藥時間的延長，大鼠肝組織中mdrla和CYP3A2的表達水平升高，且各地塞米松處理組的表達量明顯高于空白對照組。 3.2相

8、比空白組，各地塞米松組大鼠腦組織中mdrla的表達水平無明顯改變。 四、結(jié)論 1.長時間大劑量給予地塞米松可誘導(dǎo)大鼠肝組織中mdrla和CYP3A2的表達，并加速AMI的代謝和消除，其中以肝藥酶誘導(dǎo)占主要因素。代謝物NOR在體內(nèi)的消除受P-gp影響較大，因去甲替林為AMI的主要活性代謝物，其活性與母藥相似，故P-gp的誘導(dǎo)對于AMI體內(nèi)消除，解除其大劑量時的中毒亦具有重要意義。 2.試驗發(fā)現(xiàn)地塞米松可降低大鼠腦部