擬缺血性損傷對rBMECs上P-gp的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討擬缺血性損傷對大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Rat Brain MicrovascularEndothelial Cells，rBMECs)上P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的影響及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法:原代培養(yǎng)rBMECs、神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞并借助Transwell建立共培養(yǎng)體系;在共培養(yǎng)體系的基礎(chǔ)上采用Na2S2O4(終濃度為2mM)建立損傷模型，損傷時間為4h。在共培養(yǎng)體系內(nèi)室加入腫瘤壞死因子(Tu

2、mor necrosis factor-α，TNF-α)、一氧化氮合酶(Nitric-oxide synthase，NOS)、蛋白激酶C(Protein kinase C，PKC)的抑制劑H398、L-NMMA(NG-Monomethyl-L-arginine.monoacetate)、BIM(Bisindolylmaleimide)測定Rh123的表觀滲透系數(shù)(Apparent Permeability Coefficient，Pap

3、p)以反映擬缺血性損傷對rBMECs上P-gp功能的變化;測定熒光素鈉（Fluorescein Sodim Injection，NaF）內(nèi)室到外室的Papp監(jiān)測rBMECs緊密連結(jié)的完整性;采用Western Blot法確定可能引起P-gp表達(dá)和功能變化的因子、加入相應(yīng)的抑制劑測定各因子和P-gp表達(dá)變化的情況，研究擬缺血性損傷對rBMECs上P-gp影響的機(jī)制。
　　結(jié)果:1.通過Transwell成功建立了rBMECs、神經(jīng)元

4、和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng)體系。2.以Na2S2O4(終濃度為2mM)誘導(dǎo)rBMECs缺氧缺糖損傷后4h，與空白組比較，損傷組Rh123由內(nèi)室到外室的Papp顯著降低，由外室到內(nèi)室的Papp顯著增強(qiáng)，表明P-gp的功能顯著增強(qiáng);NaF由內(nèi)室到外室的Papp無顯著變化表明rBMECs緊密連結(jié)無明顯影響。3.Western Blot結(jié)果顯示，Na2S2O4（終濃度為2mM）誘導(dǎo)rBMECs缺氧缺糖損傷4h，TNF-α、NOS和PKC表達(dá)均明顯增