2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:本研究采用單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)患者腎臟手術(shù)取材標(biāo)本通過體外培養(yǎng)、鑒定人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)并觀察中藥丹參的主要成分——丹參酮ⅡA磺酸鈉(sodium tanshinone Ⅱ-A sulfonate,DS-201)對(duì)人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞體外增殖周期的影響以及P16、P27表達(dá)的影響,

2、從分子水平揭示丹參酮ⅡA磺酸鈉影響hRIFs體外增殖的作用機(jī)制,闡明其在延緩腎間質(zhì)纖維化過程中作用的具體環(huán)節(jié),為中藥丹參治療腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis,RIF)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.單側(cè)輸尿管梗阻(UU0)患者手術(shù)取材標(biāo)本,采用組織塊培養(yǎng)法體外培養(yǎng)人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞。用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistery,ICC)技術(shù)和染色體核型分析對(duì)各代細(xì)

3、胞進(jìn)行鑒定。2.取第3~5代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的hRIFs進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。①采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和圖像分析技術(shù)檢測(cè)0mg/ml、0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml DS-201孵育hRIFs 72小時(shí)后P16、P27的表達(dá),并檢測(cè)陽性率及陽性細(xì)胞平均光密度值;②流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)0mg/ml、0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml DS-201對(duì)hRIFs體外增殖周期的影響。結(jié)果:1.原代培養(yǎng)5~7天后,組織

4、塊周圍開始長(zhǎng)出細(xì)胞,以立方和長(zhǎng)梭形細(xì)胞為主,12~14天后細(xì)胞可以鋪滿瓶底;第2~5代細(xì)胞形態(tài)較為均一,多呈長(zhǎng)梭形,細(xì)胞呈柵欄狀、魚群狀排列,核橢圓形,可見1~2個(gè)核仁,胞漿豐富,細(xì)胞周圍可見長(zhǎng)短不一的細(xì)胞突起。第2代細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)波形蛋白(vimentin)強(qiáng)陽性,角蛋白(keratin)散在個(gè)別細(xì)胞陽性,第3~5代細(xì)胞除vimentin強(qiáng)陽性外,結(jié)蛋白(desmin)和keratin均呈陰性表達(dá),顯示細(xì)胞經(jīng)多次傳代后已達(dá)到純化

5、的目的;對(duì)2~5代細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析鑒定,結(jié)果顯示體外培養(yǎng)第2~5代細(xì)胞具有正常人體二倍體細(xì)胞的核型,以上結(jié)果說明第3~5代細(xì)胞為純化的正常人體二倍體核型的成纖維細(xì)胞。2.①與對(duì)照組相比,各DS-201組hRIFs隨著用藥濃度的增高,細(xì)胞染色強(qiáng)度增強(qiáng),細(xì)胞變得疏松,hRIFs形態(tài)變化較大,由均一的梭形變成橢圓形甚至圓形;各實(shí)驗(yàn)組陽性率及平均光密度值顯著增加,高于對(duì)照組(P<0.05);實(shí)驗(yàn)組間,隨著DS-201濃度的增加,P16、P

6、27的表達(dá)均有顯著差異,平均光密度值顯著增加(P<0.05)。②在0~2.0mg/ml濃度范圍內(nèi),各實(shí)驗(yàn)組隨DS-201濃度的增加,G0/G1期細(xì)胞比逐漸增多,而S期細(xì)胞比逐漸下降,各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異均有顯著意義(P<0.05)。結(jié)論:1.體外成功培養(yǎng)hRIFs,第3~5代細(xì)胞可作為實(shí)驗(yàn)供體。2.DS-201對(duì)hRIFs體外增殖周期具有抑制作用,可能是其抑制RIF的機(jī)制之一。3.DS-201可能通過促進(jìn)G1期關(guān)鍵的細(xì)胞周期素依賴激

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