生姜乙醇提取物有效部位對(duì)酒精誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、肝臟是酒精代謝的最主要器官，其中90％～95％酒精在肝臟進(jìn)行氧化代謝。長(zhǎng)期、大量飲用各種含乙醇的飲料會(huì)造成酒精性肝病。隨著我國(guó)飲酒人數(shù)的增加，酒精濫用和酒精依賴(lài)已成為我國(guó)日益嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。酒精對(duì)肝臟的損傷涉及多種機(jī)制，氧化損傷是公認(rèn)的原因之一，主要表現(xiàn)為破壞肝臟氧化還原環(huán)境，產(chǎn)生大量的活性氧(ROS)，脂質(zhì)代謝紊亂，生物大分子氧化變性以及加合物的形成，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。
　　 生姜(ginger)作為藥用，具有悠久的歷史

2、?，F(xiàn)代研究表明，生姜具有抗氧化和調(diào)節(jié)血脂等多種功效，有利于肝病的預(yù)防和轉(zhuǎn)歸；而姜辣素作為生姜的辣味成分，已證明具有多種生物學(xué)活性：抗炎、抗氧化、抗誘變、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗腫瘤等等。本課題利用姜辣素具有抗氧化活性來(lái)研究其對(duì)酒精性肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
　　 目的：
　　 本課題以姜辣素為指標(biāo)，利用大孔樹(shù)脂對(duì)生姜乙醇提取物(后稱(chēng)初提物)進(jìn)一步分離純化，篩選出抗氧化活性最有效部位，并研究其對(duì)酒精導(dǎo)致的肝細(xì)胞損傷的預(yù)防和

3、保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 一初提物極性部位分離純化：選用AB-8大孔樹(shù)脂作為固定相，不同濃度乙醇溶液作為沈脫液對(duì)初提物進(jìn)行分離純化，得到：水相、25％乙醇相、50％乙醇相、75％乙醇相和95％乙醇相5個(gè)不同極性部位。
　　 二初提物和各分離部位姜辣素含量的測(cè)定與比較：選擇紫外可見(jiàn)分光光度法，以香草醛作為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，測(cè)量并比較姜辣素的含量。
　　 三初提物和各分離部位的體外抗氧化活性比較及篩選

4、：在體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，比較初提物及各分離部位對(duì)肝勻漿生成MDA的抑制率，并與維生素E進(jìn)行比較；應(yīng)用SOD試劑盒測(cè)定各極性分離部位的類(lèi)SOD活性；綜合各部位姜辣素含量和體外抗氧化活性，得到生姜乙醇提取物有效部位(后稱(chēng)有效部位)。
　　 四酒精對(duì)肝細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)的影響以及有效部位對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用：
　　 ①建立肝細(xì)胞氧化損傷模型：以原代小鼠肝細(xì)胞為研究對(duì)象，用含不同濃度酒精的培養(yǎng)基培養(yǎng)，作用不同時(shí)間，測(cè)

5、定細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH、AST水平，細(xì)胞中MDA、GSH和SOD活性。觀察酒精對(duì)肝細(xì)胞氧化損傷的時(shí)間劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　 ②姜辣素對(duì)酒精誘導(dǎo)肝細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用：根據(jù)氧化損傷模型參數(shù)，在使用酒精作用肝細(xì)胞前，用有效部位對(duì)肝細(xì)胞預(yù)處理，觀察其對(duì)肝細(xì)胞保護(hù)的時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系，從而確定姜辣素對(duì)肝細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)測(cè)得各部位姜辣素含量分別為：初提物含6.4％，水相含1.3％，25％乙醇

6、相含11.5％，50％乙醇相含34.7％，75％乙醇相含32.3％，95％乙醇相含28.5％；其中50％乙醇相姜辣素含量最高。對(duì)MDA的抑制率、類(lèi)SOD活性方面，50％乙醇相優(yōu)于其它各相，即50％乙醇相為抗氧化活性有效部位。
　　 酒精對(duì)肝細(xì)胞的損傷程度與其濃度以及作用時(shí)間呈正相關(guān)。隨著酒精濃度和作用時(shí)間的增加，肝細(xì)胞活力下降，脂質(zhì)過(guò)氧化程度不斷加重，細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活力不斷下降，酒精濃度為100 mmol/L以及作用8 h時(shí)，影