黃芪提取物對Aβ誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元損傷保護作用及其機理的研究.pdf

1、目的：探討EA對AB誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元損傷保護作用及其可能機制。 方法：1 采用側(cè)腦室注射Aβ<,25-35>的方法建立大鼠早老性癡呆模型，運用Moms水迷宮方法觀察EA對早老性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響；利用病理組織學(xué)檢查，觀察EA對早老性癡呆模型大鼠腦組織病理性損傷的保護；運用免疫組化的方法，檢測EA對其Bcl-2和Bcl-x1表達的影響。2采用胎鼠海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)法，觀察EA對Aβ<,25-35>誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元損傷的

2、保護作用。采用檢測神經(jīng)元LDH漏出率、MTT法測細胞的活力；運用LSCM檢測胞漿鈣離子濃度變化；采用RT-PCR法檢測P53 mRNA的表達及Westem blotting檢測核因子NF-кBP65核含量的表達；利用TUNEL法檢測細胞凋亡，探討Aβ<,25-35>誘導(dǎo)神經(jīng)細胞損傷及EA保護作用的可能機制。 結(jié)果如下： 1側(cè)腦室注射Aβ<,25-35>可誘導(dǎo)大鼠早老性癡呆模型，損傷大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。EA40、80mg/k

3、g可使大鼠的逃避潛伏期降低、游泳距離縮短，學(xué)習(xí)記憶能力改善，表明EA對Aβ<,25-35>引起大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力損傷有保護作用。 2 EA 20、40、80mg/kg能改善Aβ<,25-35>引起大鼠腦組織損傷的病理組織學(xué)變化。HE染色中，EA能使損傷的腦組織中炎性細胞數(shù)及空泡細胞百分率降低。 3 EA能增強腦組織抗細胞凋亡的能力，降低神經(jīng)細胞凋亡率。同時EA20、40、80mg/kg可使大鼠腦組織Bcl-2及Bcl-x

4、1表達增加。 4 Aβ<,25-35>可誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元胞漿鈣離子濃度升高。EA 20μg·ml<'-1>能使升高的胞漿鈣離子水平降低。 5 在體外Aβ<,25-35>亦可直接引起神經(jīng)元損傷。EA 20、40μg·ml<'-1>對體外Aβ<,25-35>引起胎鼠海馬神經(jīng)元的損傷有保護作用，提高神經(jīng)細胞的活力。 6 Aβ<,25-35>可誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細胞表達P53 mRNA的表達增加。加入EA 20μg·ml<'-1

5、>后18小時行RT-PCR，電泳結(jié)果顯示P53 mRNA條帶面積及灰度均降低，積分光密度下降。表明EA可以使Aβ<,25-35>誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細胞增加P53 mRNA的表達減少。 7 Aβ<,25-35>可使海馬神經(jīng)細胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-кBP65的核含量增多。EA20 μg·ml<'-1>使NF-кBP65的核含量顯著增加。加入Aβ<,25-35>后18小時提取核蛋白行Westemblotting，結(jié)果顯示NF-кB P65條帶面