1、目的：以野生型和 Nrf2基因敲除型小鼠為對象、喂飼高脂飼料建立肥胖小鼠模型，觀察萊菔硫烷干預(yù)對不同基因背景肥胖小鼠葡萄糖代謝的調(diào)控及胰島素信號通路的作用，為控制肥胖相關(guān)的葡萄糖代謝紊亂探索有效措施。
方法：采用PCR-凝膠電泳法鑒定敲除鼠基因型。高脂飼料喂飼8周、依體重增重情況篩選出肥胖易感鼠（以下稱肥胖鼠）。將不同基因背景的肥胖小鼠分成鹽水組和萊菔硫烷干預(yù)組，前者灌胃給予生理鹽水、后者灌胃給予萊菔硫烷、劑量為100μmol
2、/kg??bw，并繼續(xù)喂飼高脂飼料。干預(yù)6周，行口服糖耐量實驗檢測小鼠葡萄糖處理能力。收集小鼠血清進(jìn)行血生化指標(biāo)檢測，ELISA法檢測小鼠血清胰島素水平。利用空腹血糖和空腹胰島素、計算胰島素敏感指數(shù)和胰島素抵抗指數(shù)。肝臟和脂肪組織固定、制作切片、進(jìn)行病理學(xué)觀察。提取肝臟和骨骼肌蛋白，Western Blot法檢測葡萄糖攝取相關(guān)基因表達(dá)。
結(jié)果：組織病理分析發(fā)現(xiàn)，野生型肥胖小鼠肝臟脂肪變性、腹股溝脂肪細(xì)胞體積增大，Nrf2基因敲
3、除型肥胖鼠肝臟脂肪變性和腹股溝脂肪細(xì)胞體積增大更為明顯；萊菔硫烷干預(yù)可明顯改善野生型和敲除型肥胖小鼠的肝臟脂肪性變、降低脂肪細(xì)胞體積。
本研究中，萊菔硫烷干預(yù)不影響小鼠攝食，但可顯著降低野生型和 Nrf2基因敲除型肥胖小鼠的胰島素水平（P<0.05），升高胰島素敏感指數(shù)（P<0.05）、降低胰島素抵抗指數(shù)（P<0.05）；萊菔硫烷對野生型肥胖小鼠的影響更為明顯。蛋白印跡分析顯示，野生型肥胖小鼠肝臟和骨骼肌PI3K和p-AktS
4、er473及GLUT4表達(dá)明顯降低，萊菔硫烷干預(yù)明顯上調(diào)野生型肥胖小鼠肝臟 IRβ、IRS-1、p-AktSer473和 GLUT4水平、升高骨骼肌 IRS-1、PI3K、p-PDK1Ser241、p-AktSer473和GLUT4的表達(dá)，增強(qiáng)胰島素信號通路和細(xì)胞對葡萄糖的攝取。與野生型小鼠相比，萊菔硫烷干預(yù)上調(diào) Nrf2基因敲除型肥胖小鼠 IRS-1和 p-PDK1Ser241水平作用不明顯，但可明顯升高Akt、p-AktSer473
5、及其下游GLUT4水平。
結(jié)論：高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠肝臟和骨骼肌胰島素信號途徑受到抑制，肥胖相關(guān)的高胰島素血癥和胰島素抵抗抑制細(xì)胞對葡萄糖的攝取。萊菔硫烷干預(yù)可明顯上調(diào)野生型肥胖小鼠胰島素信號通路相關(guān)基因表達(dá)，改善肥胖小鼠的胰島素抵抗和葡萄糖攝取障礙；相反萊菔硫烷干預(yù)對 Nrf2基因敲除型肥胖小鼠胰島素抵抗的保護(hù)則不明顯。由于 Nrf2是公認(rèn)的萊菔硫烷作用靶基因，為此本研究結(jié)果顯示Nrf2基因參與介導(dǎo)萊菔硫烷對胰島素信號通路