紫龍金克服腫瘤細胞多藥耐藥性的機制和全氟壬酸對大鼠肝臟免疫毒性的研究.pdf

1、1、中藥紫龍金克服腫瘤細胞多藥耐藥性的機制
　　 復方中藥紫龍金(Zilongjin,ZLJ)是一種新型的抗癌中藥,在臨床上廣泛應用于胃癌,結腸癌,乳腺癌等常見腫瘤的治療,具有良好的臨床抗癌療效。多藥耐藥性的產(chǎn)生是導致化學藥物治療腫瘤失敗的主要原因之一,目前已經(jīng)成為臨床腫瘤治療中的主要障礙。ZLJ與腫瘤多藥耐藥性的關系尚未見報道,為拓展其用途,本研究觀察中藥ZLJ對于克服腫瘤多藥耐藥性的作用機制。
　　 我們選擇具有顯著

2、耐藥性特征的兩對細胞株,人乳腺癌耐藥細胞MCF-7/DOX和人口腔上皮癌耐藥細胞 KBV200以及對應的敏感細胞株MCF-7、KB作為研究載體,ZLJ處理這兩對細胞。MTT法檢測ZLJ對細胞增殖的影響,結果顯示:敏感細胞和耐藥細胞對ZLJ的IC50值相近,依次為0.69±0.055 mg/ml和0.65±0.030 mg/ml,0.61±0.078 mg/ml和0.59±0.035 mg/ml,表明MCF-7/DOX和KBV200對ZL

3、J均沒有交叉耐藥性。流式細胞儀檢測細胞周期的變化,羅丹明123熒光以及活性氧自由基變化,結果顯示ZLJ對敏感和耐藥細胞均有S期阻斷作用,高濃度ZLJ處理后羅丹明123熒光強度有所升高,認為其有微弱的逆轉耐藥性作用,ZLJ處理后檢測活性氧自由基沒有變化。ZLJ分別與多柔比星 DOX和長春新堿VCR合用,可以明顯地增加DOX和VCR的活性。Western blot方法檢測相關蛋白的變化,隨著時間的增加,MCF-7/DOX中耐藥蛋白P-糖蛋白

4、和抑癌基因蛋白 p53的表達逐漸降低,同時,在高劑量下,凋亡標志蛋白PARP出現(xiàn)切割。
　　 研究表明:復方中藥ZLJ抑制耐藥細胞MCF-7/DOX和KBV200增殖,對其沒有交叉耐藥性；ZLJ的抑制作用與阻斷細胞S期DNA的合成,誘導細胞凋亡以及降低P-gp的表達有關。
　　 2、Kupffer細胞(KC)介導的全氟壬酸對大鼠肝臟免疫毒性的研究
　　 近年來,PFNA的應用越來越廣泛,自然界中野生動物及環(huán)境介質(zhì)

5、中檢測到的PFNA含量也逐漸升高。對PFNA的研究較多的是肝臟毒性,生殖與發(fā)育毒性,而對PFNA的免疫毒性的研究相對較少。
　　 KC是肝血竇內(nèi)的吞噬細胞,具有吞噬、分泌、參與免疫等功能。KC通過調(diào)節(jié)應激及代謝相關的酶積極參與肝細胞的解毒功能。本論文就是研究KC介導的PFNA對大鼠肝臟免疫毒性的機制。主要結論如下:
　　 選擇雄性SD大鼠作為研究對象,分別單獨暴露PFNA組,以及同時暴露PFNA和KC抑制劑GdCl3(每

6、隔兩天注射一次)14天后,單獨暴露組肝臟組織中炎性因子TNFα、IL-1β的分泌量顯著增加,而PFNA和GdCl3共同暴露組TNFα、IL-1β的含量與對照組水平相當。同時,活體暴露后灌流法分離的KC中TNFα、IL-1β的基因表達水平也明顯升高。此外,體外PFNA單獨暴露KC后,TNFα、IL-1β的分泌水平也顯著性上升。
　　 單獨暴露PFNA及同時暴露PFNA和GdCl3后分離肝細胞,分析其基因表達情況。結果表明,在PFN

7、A存在的條件下,KC的失活使得基因PPARα的表達升高,PPARα下游基因CPT-1,CTE-1,MTE-1均出現(xiàn)相似的趨勢。體外單獨暴露PFNA以及PFNA分別和IL-1β、TNFα共同暴露,結果表明單獨暴露組基因PPARα表達顯著升高,其共同暴露組的表達卻顯著性下降,表明KC是在PFNA的刺激下產(chǎn)生大量的IL-1β和TNFα,而IL-1β和TNFα可以抑制PPARα的表達。TNFα與IL-1β的趨勢相似,共培養(yǎng)的結果也證實了這一點。

8、
　　 轉染含有PPARα啟動子的質(zhì)粒,分別用TNFα和IL-1β處理,結果顯示處理組PPARα表達水平均下降,這說明TNFα和IL-1β能在分子水平上抑制PPARα啟動子的表達。轉染NF-κB質(zhì)粒,分別用PFNA,WY14643,TNFα和IL-1β處理,結果表明TNFα和IL-1β處理組的NF-κB表達顯著性增加,表明KC在PFNA的刺激下,產(chǎn)生IL-1β和TNFα,IL-1β和TNFα是通過刺激NF—κB通路的高表達來抑制

9、PPARα的表達,這一過程并非靠PFNA本身的抑制作用。用NF-κB的亞基p65和PPARα啟動子共轉染,用TNFα和IL-1β處理,共轉染組的PPARα表達水平明顯下降。同時,用NF-κB抑制劑處理原代肝細胞后,PPARα表達水平明顯升高,這些結果都證實了TNFα和IL-1β刺激NF-κB通路的高表達。
　　 綜上所述,PFNA暴露后,KC在介導肝臟毒性方面發(fā)揮了重要的作用,通過分泌大量的IL-1β和TNFα,從而激活NF-κ