響應(yīng)性金納米藥物載體系統(tǒng)用于克服腫瘤細(xì)胞耐藥性的研究.pdf

1、腫瘤細(xì)胞對化療藥物所產(chǎn)生的耐藥性(包括多藥耐藥，multidrugresistance,MDR)是導(dǎo)致臨床治療失敗的重要原因。多數(shù)MDR腫瘤細(xì)胞其細(xì)胞膜存在過表達(dá)的P-糖蛋白(P-gp)，可以將許多結(jié)構(gòu)和功能不同的抗癌藥物排出胞外。因此，如何規(guī)避P-gp的作用是克服此類腫瘤細(xì)胞耐藥性所亟待解決的重要問題。
　　 本論文的主要內(nèi)容是針對克服腫瘤細(xì)胞耐藥性的難題，設(shè)計(jì)合成響應(yīng)性金納米藥物載體攜載化療藥物阿霉素(DOX)，用于克服腫瘤

2、細(xì)胞的耐藥性。與小分子藥物相比，載藥納米顆粒通過內(nèi)吞方式進(jìn)入耐藥細(xì)胞，不易被P-gp蛋白排出；同時(shí)，利用腫瘤組織特殊的病理生理學(xué)特征，使載藥納米顆粒能夠最大程度到達(dá)病灶部位并釋放藥物，以此提高藥物療效和降低毒副作用。
　　 本論文的工作包括以下幾個(gè)部分：
　　 1、構(gòu)建了載有阿霉素的pH響應(yīng)性金納米顆粒藥物輸送系統(tǒng)(DOX-Hyd＠AuNPs)。將金納米顆粒表面與硫辛酸化的聚乙二醇(PEG)連接，同時(shí)在PEG鏈另一個(gè)末端

3、通過對腫瘤細(xì)胞內(nèi)酸性環(huán)境敏感的腙鍵連接抗癌藥物DOX，制備了對內(nèi)涵體/早期溶酶體pH響應(yīng)的載有DOX的金納米顆粒藥物載體；研究了該載藥系統(tǒng)在不同pH的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)在中性條件下納米藥物載體穩(wěn)定，但在酸性（pH5.0左右）溶液中，腙鍵斷裂并釋放藥物；結(jié)合金納米顆粒對阿霉素?zé)晒獾拇銣缧再|(zhì)研究了藥物的釋放行為。
　　 2、以多藥耐藥腫瘤細(xì)胞MCF-7/ADR為模型，使用第一部分合成的DOX-Hyd＠AuNPs作為藥物載體研究了其克服腫瘤

4、多藥耐藥的行為和效果。利用高效液相色譜檢測了胞內(nèi)DOX-Hyd＠AuNPs所攜載的DOX的濃度，證明DOX-Hyd＠AuNPs可逃避P-gp對DOX的泵出，使DOX在MCF-7/ADR中富集，同時(shí)降低MCF-7/ADR對DOX的排出；進(jìn)一步通過流式細(xì)胞儀、激光掃描共聚焦顯微鏡等手段，證明DOX-Hyd＠AuNPs通過內(nèi)吞方式進(jìn)入細(xì)胞，并在胞內(nèi)酸性環(huán)境中，DOX-Hyd＠AuNPs腙鍵斷裂，并釋放藥物；與游離DOX相比，DOX-Hyd＠A

5、uNPs可顯著增強(qiáng)對MCF-7/ADR的DNA損傷以及對細(xì)胞的殺傷，有效克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性。此外，發(fā)現(xiàn)DOX-Hyd＠AuNPs還可作為熒光探針，對細(xì)胞內(nèi)游離藥物進(jìn)行監(jiān)測。
　　 3、構(gòu)建了載有阿霉素的pH響應(yīng)性金納米殼藥物輸送系統(tǒng)(DOX-Hyd＠HAuNS)。通過透射電子顯微鏡、紫外-可見光譜等手段對DOX-Hyd＠HAuNS進(jìn)行了表征，并在細(xì)胞水平上，利用流式細(xì)胞儀等手段，證明DOX-Hyd＠HAuNS更有效地將DOX輸

6、送到MDA-MB-231乳腺癌球囊細(xì)胞中；進(jìn)一步研究了金納米殼光熱轉(zhuǎn)化效應(yīng)與化療藥物是否具有對腫瘤干細(xì)胞的協(xié)同治療效果，并通過MTT和球囊形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，金納米殼的光熱轉(zhuǎn)換增強(qiáng)了DOX-Hyd＠HAuNS對MDA-MB-231乳腺癌球囊細(xì)胞的毒性，降低了乳腺癌球囊細(xì)胞的“干性”。
　　 4、制備了基于聚己內(nèi)酯-聚磷酸酯嵌段共聚物(PCL-b-PEEP)的囊泡，研究了其在磷酸二酯酶催化下對包載藥物的可控釋放。以三異丙醇鋁作為引發(fā)劑，

7、通過開環(huán)聚合的方法合成了PCL-b-PEEP，并利用核磁共振，凝膠滲透色譜等對嵌段共聚物進(jìn)行了表征；進(jìn)一步結(jié)合薄膜水化和薄膜擠出制備了納米尺度PCL-b-PEEP囊泡，通過透射電子顯微鏡、動態(tài)光散射、激光掃描共聚焦顯微鏡等手段表征和證明其囊泡結(jié)構(gòu)；通過pH梯度方法包載阿霉素鹽酸鹽，載藥量為4.38％，發(fā)現(xiàn)包載DOX/PCL-b-PEEP的囊泡在磷酸二酯酶催化作用下，140小時(shí)內(nèi)，釋放83.8%的DOX，而沒有酶存在的情況下，僅釋放約30