馬索羅酚和丹參酮ⅡA對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠脾淋巴細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激和免疫調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:多發(fā)性硬化(MultipleSclerosis，MS)，是累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的一種慢性炎癥性脫髓鞘性疾病，發(fā)病機(jī)制尚不明確。大多數(shù)研究表明，免疫損傷和氧化應(yīng)激在MS的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。Nrf2/ARE通路的激活能夠保護(hù)機(jī)體免受免疫及氧化應(yīng)激的損傷，本課題組前期應(yīng)用Nrf2通路的經(jīng)典激活劑萊菔硫烷初步證實(shí)了激活此通路能夠降低EAE發(fā)病率以及減輕疾病嚴(yán)重程度。而萊菔硫烷尚未用于臨床，我們希望通過(guò)實(shí)驗(yàn)，從已經(jīng)用于臨床的Nrf

2、2通路激活性藥物中篩選出抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等方面可以跟萊菔硫烷媲美的藥物，從而為MS的治療提出新的藥物。馬索羅酚是一種化療藥物，丹參酮ⅡA常用于冠心病的治療，此兩者都被證實(shí)具有Nrf2通路激活劑的作用，本實(shí)驗(yàn)利用實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(ExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis，EAE)小鼠的脾細(xì)胞，研究馬索羅酚和丹參酮ⅡA對(duì)EAE小鼠脾細(xì)胞中抗氧化酶、細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-

3、17A的表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，初步探討馬索羅酚和丹參酮ⅡA對(duì)EAE的抗氧化和免疫調(diào)節(jié)作用，一方面希望為MS的治療提出新的藥物，另一方面希望能挖掘這兩種藥物在調(diào)節(jié)免疫方面的特性。
　　方法:選擇8只C57BL/6雌性小鼠，周齡8-10周，體重18-22g，利用MOG35-55多肽、結(jié)核桿菌、完全弗氏佐劑、百日咳毒素等對(duì)小鼠進(jìn)行免疫制作成EAE模型，每天2次對(duì)其進(jìn)行神經(jīng)功能的評(píng)分，于發(fā)病高峰(8分及以上，約免疫后20天)隨機(jī)選擇5只處死，在

4、無(wú)菌的環(huán)境中取出脾臟，并用10％胎牛血清的RPMI1640無(wú)菌培液制備成單細(xì)胞懸液（細(xì)胞密度控制在5*106/L左右），并給予MOG35-55多肽進(jìn)行再刺激。將此細(xì)胞懸液隨機(jī)分為對(duì)照組、萊菔硫烷組、馬索羅酚組和丹參酮ⅡA組，空白對(duì)照組加入無(wú)菌DMSO（0.6μl/200ul）萊菔硫烷組加入萊菔硫烷稀釋液（0.9μg/ml）馬索羅酚組加入馬索羅酚稀釋液（6.0μg/ml）丹參酮ⅡA組加入丹參酮ⅡA稀釋液（3.0μg/ml），保證所有組的D

5、MSO含量均≤0.3％。將4組細(xì)胞懸液培養(yǎng)24小時(shí)后離心，利用Westernblot的方法檢測(cè)細(xì)胞沉渣中的Ⅰ型血紅素氧化酶HO-1，采用ELISA的方法檢測(cè)上清液中的IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、小鼠脾細(xì)胞中HO-1表達(dá)情況:萊菔硫烷組、馬索羅酚組、丹參酮ⅡA組EAE小鼠脾細(xì)胞與對(duì)照組相比，HO-1的表達(dá)明顯增多，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。丹參酮ⅡA組HO-1表達(dá)

6、明顯高于萊菔硫烷組及馬索羅酚組(P＜0.05);萊菔硫烷組與馬索羅酚組HO-1表達(dá)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2、上清液中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A的表達(dá)情況:萊菔硫烷組、馬索羅酚組、丹參酮ⅡA組與對(duì)照組相比，IFN-γ的表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);IL-4、IL-10的表達(dá)明顯增多，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);IL-17A的表達(dá)明顯減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05