白花丹素對樹突狀細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、多發(fā)性硬化癥（Multiple Sclerosis，MS）是一種慢性自身免疫疾病，其特征為炎性脫髓鞘以及進(jìn)一步的脊髓損傷。MS因其具有高發(fā)病率、病程長以及青壯年易患而備受重視，目前尚無滿意的治療方式，因此，探索新型藥物對治療或是改善MS具有重要的意義。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（Experimental Autoimmune Encephalomyelitis，EAE）是MS經(jīng)典的動(dòng)物模型，主要用于自身免疫炎癥相關(guān)的基礎(chǔ)研究。樹突狀細(xì)胞（

2、Dendrite cell，DC）作為專職的抗原提呈細(xì)胞，在適應(yīng)性免疫應(yīng)答的初始階段起到至關(guān)重要的作用。白花丹素(PL)是一種中藥復(fù)合物，具有免疫調(diào)節(jié)活性，從而其可能成為一種新的免疫相關(guān)疾病的候選藥物，同時(shí)白花丹素對DC的作用以及機(jī)制尙不清楚。
　　目的：體外實(shí)驗(yàn)探討白花丹素對人CD14陽性單核細(xì)胞來源的DC的分化、成熟、抗原攝取和DC介導(dǎo)的T細(xì)胞增殖的影響，以及其對DC炎癥因子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究了白花丹素對EAE

3、作用和細(xì)胞機(jī)制。
　　方法：體外研究用磁珠分選人外周血中CD14陽性單核細(xì)胞，隨后加入細(xì)胞因子誘導(dǎo)其向DC分化，并用脂多糖刺激其成熟，流式細(xì)胞術(shù)檢測白花丹素處理后，未成熟DC（iDC）以及成熟DC（mDC）表面標(biāo)記的表達(dá)情況。同時(shí)，白花丹素預(yù)處理后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測FITC-dextran的攝取來探究iDC抗原攝取能力；用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)方法檢測mDC刺激T細(xì)胞增殖的能力，并用實(shí)時(shí)定量PCR檢測DC中T細(xì)胞極化以及炎癥相關(guān)細(xì)胞因子

4、的表達(dá)水平。體內(nèi)研究應(yīng)用注射髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白（Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein， MOG）誘導(dǎo)小鼠EAE模型，應(yīng)用白花丹素腹腔注射治療，對小鼠進(jìn)行臨床評分，處死后對其脊髓進(jìn)行組化檢測，包括H&E染色以及Luxol fast blue染色。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測白花丹素治療以及未治療的EAE小鼠脾臟中DC細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)中，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果提示白花丹素可以抑制人單核細(xì)胞來源的

5、DC細(xì)胞的分化、成熟及其功能，包括降低iDC和mDC表面標(biāo)記CD80、CD83、CD86和 HLA-DR的表達(dá)，iDC抗原攝取以及mDC的抗原呈遞能力；同時(shí)，白花丹素也能抑制mDC細(xì)胞中Th1，Th17細(xì)胞極化的相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)；此外，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，白花丹素對DC細(xì)胞均具有抑制作用；進(jìn)一步的，本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)白花丹素對小鼠DC細(xì)胞系DC2.4同樣具有抑制作用，明顯緩解小鼠EAE的發(fā)病以及臨床癥狀。
　　結(jié)論：白花丹素可以抑制DC細(xì)