伏立諾他對(duì)樹突狀細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、多發(fā)性硬化癥(Multiple Sclerosis，MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥性脫髓鞘性疾病，目前臨床上沒有滿意的治療藥物。因此，探索新藥物對(duì)于改善MS的治療非常重要。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental AutoimmuneEncephalomyelitis，EAE)是MS的動(dòng)物模型，也是自身免疫炎癥反應(yīng)基礎(chǔ)研究的重要模型。MS和EAE均被證明是CD4陽(yáng)性T細(xì)胞，主要是TH1和TH17細(xì)胞，介導(dǎo)的自身免疫炎癥性神經(jīng)

2、退行性疾病。樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell，DC)是一種專職的抗原提呈細(xì)胞，在免疫反應(yīng)的起始中起著重要作用。未成熟樹突狀細(xì)胞(immature Dendritic Cell，iDC)的主要功能是抗原提呈，而成熟樹突狀細(xì)胞(mature Dendritic Cell，mDC)主要功能是誘導(dǎo)T細(xì)胞活化。并且DC可根據(jù)不同的信號(hào)刺激面對(duì)應(yīng)的分泌TH1、TH2、TH17以及Treg細(xì)胞分化相關(guān)的細(xì)胞因子，而這些不同亞型T細(xì)胞極化因子可

3、以誘導(dǎo)初始T細(xì)胞向相應(yīng)的T細(xì)胞亞型極化，進(jìn)而與不同類型疾病相對(duì)應(yīng)T細(xì)胞亞型行駛不同的生理功能。基于DC在免疫系統(tǒng)中的重要作用，它可能成為控制自身免疫和炎癥性疾病的潛在治療靶點(diǎn)。伏立諾他(Vorinostat)是一種組蛋白去乙?；?Histone Deacetylase，HDAC)抑制劑，已被批準(zhǔn)用于臨床治療皮膚T細(xì)胞淋巴瘤，但是伏立諾他對(duì)于自身免疫病如MS和其動(dòng)物模型EAE的研究并不完善，這也是本研究的重點(diǎn)內(nèi)容。
　　 研究目

4、的:體外實(shí)驗(yàn)探究組蛋白去乙?；敢种苿┓⒅Z他對(duì)人CD14陽(yáng)性單核細(xì)胞來源的DC的分化、成熟、抗原攝取和DC介導(dǎo)的T細(xì)胞增殖的影響，以及對(duì)炎癥相關(guān)因子分泌的調(diào)節(jié)作用;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究了伏立諾他對(duì)EAE作用和細(xì)胞機(jī)制。本研究為MS等炎癥性疾病探索新的治療途徑。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法:體外研究用磁珠分離法從人外周血單核細(xì)胞中分離出CD14陽(yáng)性單核細(xì)胞，然后誘導(dǎo)向DC分化和成熟，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表面標(biāo)記。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FITC-dextran攝取

5、的方法檢測(cè)iDC抗原攝取能力。用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)方法檢測(cè)mDC刺激T細(xì)胞增殖的能力。并用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況。體內(nèi)研究應(yīng)用小鼠注射髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(Myelin OligodendrocyteGlycoprotein，MOG)誘導(dǎo)EAE，同時(shí)應(yīng)用伏立諾他灌胃治療，每天觀察小鼠并做臨床評(píng)分。脊髓切片用H&E染色、Luxol fast blue染色和免疫組化染色。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EAE中伏立諾他對(duì)脾臟中不同T細(xì)胞亞型的影

6、響，以及對(duì)DC的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:體外實(shí)驗(yàn)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明伏立諾他降低iDC和mDC表面標(biāo)記CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表達(dá)，即抑制DC分化和成熟。并且，伏立諾他降低了iDC抗原攝取能力和mDC介導(dǎo)的T細(xì)胞增殖，抑制了DC中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-12p35和IL-23p40的mRNA表達(dá)水平。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示伏立諾他治療可降低EAE的發(fā)病率，推遲發(fā)病時(shí)間，降低了臨床評(píng)分平均分、總分和最高分。H&E和Luxo

7、l fast blue染色結(jié)果顯示，伏立諾他緩解小鼠脊髓中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和脫髓鞘情況。脊髓石蠟切片免疫組化結(jié)果顯示伏立諾他抑制T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。而且，伏立諾他抑制EAE中TH1和TH17細(xì)胞，降低了DC表面標(biāo)記表達(dá)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與體外伏立諾他抑制人CD14陽(yáng)性單核細(xì)胞來源的DC的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。
　　 總之，伏立諾他可抑制人CD14陽(yáng)性單核細(xì)胞來源的DC分化、成熟和抗原攝取及抗原提呈功能。伏立諾他可抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫炎癥