胃癌組織中S100A2基因的表達(dá)及突變、雜合性缺失研究.pdf

1、目的:檢測(cè)胃癌組織中S100A2基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平，評(píng)價(jià)S100A2基因在胃癌發(fā)生過程中的可能作用機(jī)制。檢測(cè)胃癌組織中S100A2基因的突變，LOH情況，探討胃癌組織中S100A2基因異常表達(dá)的主要機(jī)制。從DNA水平、mRNA水平、蛋白表達(dá)水平，闡明S100A2基因在胃癌發(fā)生及演進(jìn)過程中的作用。 方法:采用PCR-SSCP和微衛(wèi)星結(jié)合PCR-變性聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，從DNA水平分析胃癌組織中S100A2基因的突變及

2、缺失，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)，分析胃癌組織中S100A2基因mRNA的表達(dá)狀況，應(yīng)用WesternBlotting、免疫組織化學(xué)技術(shù)，研究胃癌發(fā)生發(fā)展過程中S100A2蛋白表達(dá)水平的改變，從而闡明S100A2基因在胃癌發(fā)生過程中的作用及其可能分子機(jī)制。 結(jié)果:免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示：S100A2蛋白定位于胃粘膜上皮細(xì)胞的胞漿及胞核，呈黃色至棕黃色著色。40例正常胃粘膜組織中S100A2蛋白全部為陽性表達(dá)，表達(dá)率為100％(40/4

3、0)。40例胃癌組織中只有21例呈陽性表達(dá)，表達(dá)率為52.50％(21/40)?？梢娢赴┙M織中存在S100A2蛋白表達(dá)下調(diào)，其陽性表達(dá)率明顯低于正常胃粘膜組織(P＜0.05)。其中，高分化胃癌S100A2蛋白表達(dá)率為75.00％(12/16)，中分化胃癌為53.84％(7/13)，低分化胃癌為18.18％(2/11)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，低分化胃癌組S100A2蛋白表達(dá)率明顯低于高分化胃癌組(P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組S100A2蛋白

4、陽性表達(dá)率僅為29.41％(5/17)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組S100A2蛋白陽性表達(dá)率為69.57％(16/23)，差異有顯著性意義(P＜0.05)?！　esternBlotting結(jié)果顯示：正常胃粘膜組織中S100A2蛋白表達(dá)強(qiáng)度為1.242±0.221，胃癌組織中表達(dá)強(qiáng)度為0.538±0.199，較正常胃粘膜組織明顯降低(P＜0.05)。S100A2在高、中、低分化胃癌組中蛋白表達(dá)強(qiáng)度分別為0.833±0.198、0.498±0.

5、231、0.199±0.112，呈逐漸降低趨勢(shì)(P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組S100A2蛋白表達(dá)強(qiáng)度為0.212±0.159，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組為0.766±0.201，兩組間的差異有顯著性意義(P＜0.05)?！　T-PCR結(jié)果顯示：正常胃粘膜組織中S100A2基因的mRNA表達(dá)強(qiáng)度為1.192±0.254，胃癌組織中表達(dá)強(qiáng)度為0.502±0.301，與正常胃粘膜相比顯著降低(P＜0.05)。S100A2基因mRNA表達(dá)強(qiáng)度

6、在高、中、低分化胃癌中分別為0.799±0.390、0.550±0.252、0.311±0.188，呈逐漸降低趨勢(shì)(P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組S100A2基因的mRNA相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度為0.266±0.242，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組為0.692±0.212，兩組比較差異有顯著性意義(P＜0.05)。　　采用微衛(wèi)星結(jié)合PCR-變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果顯示：40例胃癌標(biāo)本中，未發(fā)現(xiàn)S100A2基因存在缺失?！　〔捎肞CR-SSCP

7、檢測(cè)結(jié)果顯示：40例胃癌標(biāo)本中，S100A2基因的第二外顯子和第三外顯子均未檢測(cè)到突變。 結(jié)論:胃癌組織S100A2蛋白陽性表達(dá)率明顯低于正常胃粘膜，S100A2蛋白表達(dá)下調(diào)可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)；在不同分化胃癌中S100A2蛋白表達(dá)率不相同，隨著分化程度的降低，陽性表達(dá)率降低，表明S100A2蛋白表達(dá)與胃癌分化程度有關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組S100A2蛋白陽性表達(dá)率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組，提示S100A2蛋白表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)