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文檔簡介
1、目的:
1.研究S100P和S100A2蛋白在人外泌汗腺的表達情況,并聯(lián)合特定角蛋白進行免疫熒光雙染以區(qū)分外泌汗腺的分泌部和導(dǎo)管部。2.研究SD大鼠足墊汗腺發(fā)生發(fā)育和功能成熟的過程。
方法:
1.獲取人體正常皮膚標本,制成石蠟包埋標本后進行連續(xù)切片,利用免疫熒光組織化學(xué)染色法檢測S100P和S100A2在外泌汗腺的表達情況,然后利用免疫熒光雙染檢測以下蛋白:α-SMA/S100P,CK14/S100A2,C
2、K7/S100A2,CK15/S100P和CK18/S100A2,在熒光顯微鏡下觀察并拍照。2.獲取SD大鼠從E16.5天-E21.5天、出生后P1-P14天、3周、4周及成年大鼠的足墊全層皮膚標本,進行石蠟包埋及切片,行HE染色,及免疫熒光組織化學(xué)染色法檢測以下蛋白:CAⅡ、F-actin、β-catenin、CollagenⅣ;免疫熒光雙染檢測:α-SMA/CK14;并利用碘-淀粉實驗檢測不同發(fā)育階段SD大鼠足墊的發(fā)汗功能。
3、 結(jié)果:
1.人外泌汗腺免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:S100P僅表達于汗腺導(dǎo)管部的內(nèi)層細胞,S100A2表達于除表皮內(nèi)導(dǎo)管外的其他導(dǎo)管部的外層細胞,兩者在分泌部均不表達。2.SD大鼠足墊皮膚HE染色結(jié)果顯示:E19.5天表皮基底層出現(xiàn)汗腺胚芽,P1天汗腺細胞長入真皮淺層,并呈條索狀繼續(xù)向真皮深層生長,P7天部分汗腺形成中央腔,P10天分泌部腺體初步形成球狀結(jié)構(gòu)。熒光染色顯示:汗腺側(cè)膜持續(xù)表達β-catenin,P6天汗腺細
4、胞開始表達CollagenⅣ,P9天F-actin開始在頂膜表達,P13天以上極性蛋白均分別完整表達于汗腺側(cè)膜、基底膜和頂膜。CAⅡ的熒光染色和α-SMA+CK14的雙染結(jié)果顯示:CK14在汗腺細胞持續(xù)表達,P6天部分汗腺細胞開始表達CAⅡ和α-SMA,而內(nèi)層細胞CK14表達則逐漸減弱,P13天分泌部散在的分泌細胞表達CAⅡ,分泌細胞完全不表達CK14,肌上皮細胞表達CK14和α-SMA,導(dǎo)管部細胞均表達CK14,不表達CAⅡ和α-SM
5、A,與成年大鼠的表達情況一樣。碘-淀粉實驗結(jié)果顯示:直到P14天SD大鼠足墊汗腺才開始出現(xiàn)泌汗功能,P21天泌汗功能得到進一步完善。
結(jié)論:
1.S100P和S100A2可作為外泌汗腺導(dǎo)管部不同細胞的標記蛋白,將S100P或S100A2聯(lián)合CK7或CK15或CK18進行免疫熒光組織化學(xué)雙染,可快速、準確、直觀地區(qū)分外泌汗腺分泌部和導(dǎo)管部。2.SD大鼠出生時足墊汗腺僅完成了初級發(fā)育,細胞分化以及汗腺結(jié)構(gòu)和功能成熟主要發(fā)
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