人外泌汗腺三維重建過程中細胞增殖與分化的研究.pdf

1、目的：
　　l、在汗腺組織三維重建過程中，通過檢測角蛋白和α-SMA在不同時間點的變化，來探討外泌汗腺細胞的發(fā)育和分化情況。
　　2、明確汗腺組織三維重建過程中細胞增殖的變化及增殖細胞的類型。
　　方法：將原代培養(yǎng)的汗腺細胞與Matrigel混合制成細胞混懸液注射至裸鼠腹股溝區(qū)的皮下組織中，制作汗腺細胞體內三維培養(yǎng)的模型。在接種后的不同時間點，1-8天及2-6周，將膠栓取出進行免疫熒光染色。l、檢測 K7、K8、α-S

2、MA、K5、K14、K15。2、檢測Ki67，并且計算不同時間點膠栓的Ki67標記指數(shù)。在第4,5和6周膠栓中，通過用Ki67/K7, Ki67/K14和 Ki67/α-SMA這三對抗體行免疫熒光雙染色，來鑒別增殖細胞的類型。
　　結果：
　　l、在汗腺組織三維重建過程中，角蛋白和α-SMA的表達隨體內培養(yǎng)時間不同而改變。在體內培養(yǎng)第1天，所有細胞均表達K5、K14且呈強陽性，K15表達呈弱陽性， K7、K8和 alpha-

3、SMA無表達。隨著時間的推移，在形成的類球型三維結構中的內層出現(xiàn)K7和K8的表達，但失去K5和K14的表達，外層出現(xiàn)α-SMA的表達，但失去K15表達。K8表達首先出現(xiàn)在第14天，K7及alpha-SMA出現(xiàn)在第21天。K15、 K14、K5分別在第14天、第21天和第28天開始消失。在培養(yǎng)至4、5和6周時，類球型結構形成具有類分泌部及曲導管狀結構，可以通過免疫組化來區(qū)分開來。
　　2、汗腺細胞在體內培養(yǎng)第1天時Ki67的標記指數(shù)

4、是30.53?2.47％，在培養(yǎng)至第2天時，Ki67的標記指數(shù)迅速達到一個峰值81.43±5.44%。隨后，隨著汗腺細胞培養(yǎng)時間的延長，Ki67的標記指數(shù)逐步下降，在第6周時降至最低2.87±1.27%。免疫熒光雙染色顯示：K14/Ki67雙染色細胞占Ki67陽性細胞的80%，而K7/Ki67和α-SMA/Ki67雙染色細胞僅占Ki67陽性細胞的10%。
　　結論：
　　l、在汗腺重建過程中，角蛋白和α-SMA表達的變化與人