胃癌染色體等位基因雜合缺失分析的精細(xì)定位研究.pdf

1、目的:癌基因的激活以及抑癌基因的缺失、功能喪失是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。通過檢測腫瘤組織與相應(yīng)正常組織染色體上DNA多態(tài)性標(biāo)記的LOH發(fā)生頻率，可以推測出在LOH高發(fā)區(qū)可能存在有抑癌基因。課題組前期對胃癌進(jìn)行全基因組雜合缺失分析掃描，發(fā)現(xiàn)了21個高頻雜合缺失位點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過對其中15個位點(diǎn)進(jìn)行雜合缺失精細(xì)定位研究，以期縮小候選胃癌相關(guān)基因的篩查范圍，為以后進(jìn)一步篩選、定位、克隆胃癌相關(guān)抑癌基因，揭示胃癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子遺傳學(xué)機(jī)制奠

2、定基礎(chǔ)。 方法:94例經(jīng)病理證實(shí)的胃癌腫瘤組織及相應(yīng)正常粘膜組織提取DNA，用熒光標(biāo)記的微衛(wèi)星引物對胃癌及相應(yīng)正常組織DNA行“touch-down”PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物在ABI Prism 3730 DNA測序儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳及Genotyper 3.7軟件進(jìn)行掃描及雜合缺失分析，計(jì)算、統(tǒng)計(jì)各定位區(qū)間位點(diǎn)的雜合缺失率。雜合缺失結(jié)果與臨床病理因素之間關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)(或Fisher's 確切概率檢驗(yàn))。 結(jié)果:針對15個高頻

3、雜合缺失位點(diǎn)進(jìn)行的雜合缺失分析研究，篩選出14個腫瘤相關(guān)基因精細(xì)定位候選區(qū)間，分布在1、2、11、12、15、16、18、20號染色體上。多數(shù)位點(diǎn)與腫瘤的生物學(xué)特征及臨床指標(biāo)之間無相關(guān)性，也有部分位點(diǎn)與腫瘤分化、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫瘤分期等有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論:通過對課題組前期篩選的胃癌15個高頻LOH微衛(wèi)星位點(diǎn)的雜合缺失精細(xì)定位分析，發(fā)現(xiàn)了14個范圍較小的高頻雜合缺失區(qū)域，這些區(qū)域內(nèi)的候選基因：APITD1、TNF