基于活化HIV前病毒的中藥分子篩選及初步驗(yàn)證.pdf

1、[目的]
　　本項(xiàng)目擬在細(xì)胞模型上篩選能活化HIV潛伏病毒庫(kù)的中藥活性分子，并從分子水平進(jìn)一步驗(yàn)證其對(duì)HIV潛伏病毒庫(kù)的活化效能，初步探討其活化HIV潛伏庫(kù)的作用機(jī)制，為后續(xù)開發(fā)具有高效激活效能的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　[方法]
　　本實(shí)驗(yàn)室所需2株艾滋病毒潛伏細(xì)胞模型J-lat GFP clone A72和J-lat full length clone10.6由香港大學(xué)艾滋病研究所惠贈(zèng)。特定濃度的中藥分子溶液作用J-

2、lat GFP clone A72模型，運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)該細(xì)胞模型中綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)的熒光強(qiáng)度變化;將初篩得到的中藥活性分子作用于細(xì)胞模型J-lat full length clone10.6，流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP熒光強(qiáng)度、酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)艾滋病毒的標(biāo)志性蛋白P24的相對(duì)含量、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞模型細(xì)胞周期變化;并將中藥活性分子作用人外周血，流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞活化分子CD

3、69、CD38和HLA-DR的表達(dá)變化。
　　[結(jié)果]
　　1.通過J-lat GFP clone A72細(xì)胞模型已篩選得到具有活化作用的中藥分子，以白藜蘆醇和鹽酸小檗堿作為代表性藥物，作用強(qiáng)度分別為對(duì)照組的2.19倍和2.00倍。
　　2.白藜蘆醇和鹽酸小檗堿分別作用于J-lat full length clone10.6細(xì)胞模型后，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明P24蛋白相對(duì)含量與藥物濃度存在劑量依賴關(guān)系，且P24相對(duì)含

4、量與GFP熒光強(qiáng)度也具有明顯相關(guān)性。
　　3.鹽酸小檗堿能影響J-lat full length clone10.6細(xì)胞的細(xì)胞周期，使G1期細(xì)胞減少，G2期細(xì)胞增多。
　　4.血液學(xué)實(shí)驗(yàn)表明白藜蘆醇能刺激淋巴細(xì)胞早期活化分子CD69的表達(dá)，中晚期活化分子CD38、HLA-DR無顯著變化。
　　[結(jié)論]
　　鹽酸小檗堿和白藜蘆醇在體外細(xì)胞模型中具有抗HIV潛伏作用;血液學(xué)的探討性實(shí)驗(yàn)表明白藜蘆醇可能具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞