表達(dá)HIV-1多價(jià)合成基因的痘苗病毒載體構(gòu)建及疫苗株篩選.pdf

1、由人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)感染而引發(fā)的人獲得性免疫缺陷綜合癥(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS,艾滋病)不僅嚴(yán)重影響人類的健康,還給各國(guó)的經(jīng)濟(jì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān).雖然現(xiàn)有的干預(yù)措施和抗病毒藥物的聯(lián)合療法使控制和治療艾滋病取得很大進(jìn)展,但并沒(méi)有阻斷HIV的傳播,并出現(xiàn)了一些新的問(wèn)題.為有效控制HIV的傳播,需盡快研制出安全、有效的HIV疫

2、苗.HIV基因組變異較大,使HIV在流行過(guò)程中出現(xiàn)不同的亞型.但在一定的時(shí)間和地域內(nèi)HIV的變異是相對(duì)穩(wěn)定的,會(huì)出現(xiàn)具有不同特點(diǎn)的地區(qū)性代表毒株.疫苗的設(shè)計(jì)應(yīng)該與使用疫苗地區(qū)的毒株流行趨勢(shì)聯(lián)系起來(lái).中國(guó)目前流行的HIV-1毒株主要是印度B亞型和泰國(guó)C亞型,而B亞型的變種B'亞型和C亞型重組的毒株B'/C亞型在中國(guó)的流行呈迅猛增加之勢(shì).為研究適合于中國(guó)的疫苗,該研究以中國(guó)的流行株B'/C亞型為基礎(chǔ)來(lái)研制侯選疫苗.表達(dá)HIV-1合成基因ga

3、gpolnef重組痘苗病毒疫苗株的構(gòu)建是將質(zhì)粒pCR-Script-c-clade-syngpnef用KpnI酶切獲得合成基因部分syngpnef,將其插入到轉(zhuǎn)移載體pVI75的相應(yīng)酶切位點(diǎn)構(gòu)建轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pVI75-syngpnef,再將質(zhì)粒pVI75-syngpnef與痘苗病毒天壇株共感染雞胚成纖維細(xì)胞,經(jīng)過(guò)兩輪篩選獲得重組病毒疫苗株.第一輪篩選加G418選擇壓力,挑選藍(lán)斑.在G418壓力下經(jīng)三代噬斑純化,獲得病毒基因組上既有目的基因又

4、帶標(biāo)記基因的發(fā)生第一次同源重組的痘苗病毒;第二輪篩選去除G418壓力,挑選白斑,經(jīng)三代純化獲得病毒基因組上只有目的基因、不帶標(biāo)記基因,發(fā)生了第二次同源重組的痘苗病毒.篩選得到的陽(yáng)性重組病毒經(jīng)PCR、Dot Blotting檢測(cè)標(biāo)記基因已經(jīng)刪除,目的基因被整合到病毒基因組上;Western Blotting也檢測(cè)到目的基因的融合表達(dá).表明已成功構(gòu)建表達(dá)HIV-1合成基因gagpolnef的重組痘苗病毒疫苗株,為研制具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的HIV