編碼HIV-1 CN54 gp120基因的重組脊髓灰質(zhì)炎病毒載體的構(gòu)建.pdf

1、目的： 用基因重組技術(shù)，構(gòu)建含有中國流行株HIV-1 CN54 gp120基因的重組PV載體，為HIV疫苗的進一步研究奠定基礎(chǔ)。 方法： 采用加端PCR的方法，擴增出兩端帶有AatⅡ和SnaBⅠ限制性內(nèi)切酶位點的gp120基因片段，經(jīng)雙酶切回收純化后，將這段基因片段與經(jīng)過雙酶切消化后回收純化的PV載體大片段進行連接。將重組子轉(zhuǎn)化E.coli感受態(tài)細胞，提取質(zhì)粒，進行PCR、酶切鑒定和DNA序列分析。鑒定基因重組正

2、確的表達質(zhì)粒經(jīng)大量擴增純化后，轉(zhuǎn)染處于對數(shù)生長期的HeLa細胞，提取細胞總RNA，進行RT-PCR檢測目的基因在mRNA水平上的表達情況；提取細胞總蛋白，進行Western-Blot分析檢測目的基因在蛋白水平上的表達情況。 結(jié)論： 1.首次成功構(gòu)建了包含中國主要流行株HIV-1 B'/C重組毒株CN54 gp120基因的重組PV缺陷型疫苗表達載體。 2.完成對重組PV載體的鑒定，并將其轉(zhuǎn)染HeLa細胞，對目的基因