鐮刀菌幾丁質合成酶Chs1和Chs2基因小片段RNA干擾功能分析.pdf

1、小麥赤霉病（Fusarium Head Blight，FHB）是由鐮刀菌（Fusarium）引起的一種世界性真菌病害。小麥作為世界第二大糧食作物，缺乏對赤霉病的天然抗性，易造成大規(guī)模的赤霉病害的爆發(fā)，導致產量的大幅下降甚至顆粒無收。因此需要一種有效的方法來增強小麥對赤霉病的抵抗力。RNAi技術的出現對小麥抗性的提高提供了一個新思路。幾丁質是一種真菌細胞壁的重要組成成分，是由幾丁質合成酶(chitinsynthases，Chs)催化合成的

2、，病原真菌通常含有多個幾丁質合成酶基因，而植物中未發(fā)現幾丁質合成酶的存在，因此幾丁質合成酶是抗真菌藥物的理想靶標。本研究利用Gateway技術構架了不同的幾丁質合成酶（Chs1，Chs2）基因小片段的RNAi表達載體，通過RNAi技術篩選出對亞洲鐮刀菌生長發(fā)育和致病力影響較大的基因小片段，為小麥的抗病改良提供材料。
　　本研究主要內容包括：⑴將幾丁質合成酶（Chs1）基因分成5個基因片段，每個基因段都構建成具有單個莖環(huán)結構的RNA

3、i表達載體，通過原生質體轉化法，將基因小片段導入野生型亞洲鐮刀菌5035，定點整合到PLS基因位點，在其體內表達產生干擾小片段。結果表明，與野生型5035相比，Chs1基因各段RNAi轉化子生長遲緩，分生孢子的產量有不同程度的降低，致病力下降了48.2％-68.6％，細胞壁幾丁質含量也下降了11％-23％。⑵與Chs1構建方法相同，將Chs2分為5個基因片段，每個片段構建成單莖環(huán)的RNAi載體。通過原生質體轉化法，得到真菌轉化子，高滲透