富氫水和依達(dá)拉奉后處理對乳鼠離體腦片谷氨酸損傷的保護(hù)作用以及對NF-κB信號通路的影響.pdf

1、目的：比較不同濃度富氫水和依達(dá)拉奉后處理對乳鼠離體腦片谷氨酸損傷的保護(hù)作用，研究兩者后處理對腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用效果。
　　方法：本實驗通過乳鼠離體腦片谷氨酸損傷建立腦缺血-再灌注損傷模型，觀察不同濃度富氫水和依達(dá)拉奉后處理對乳鼠離體腦片缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用。體外培養(yǎng)SD乳鼠皮質(zhì)腦片至第六天，隨機分為9組：對照組(Control，C組)、1mmol/L谷氨酸損傷組(Glutamic Acid，GA組)、1mmol/L

2、谷氨酸損傷+200μmol/L依達(dá)拉奉后處理組(ED組)、1mmol/L谷氨酸損傷+16ppb(16μmol/L)富氫水后處理組(GA+H16組)、1mmol/L谷氨酸損傷+32ppb(32μmol/L)富氫水后處理組(GA+H32組)、1mmol/L谷氨酸損傷+64ppb(64μmol/L)富氫水后處理組(GA+H64組)、1mmol/L谷氨酸損傷+16ppb(16μmol/L)富氫水和200μmol/L依達(dá)拉奉聯(lián)合后處理組(GA+H

3、16+ED組)、1mmol/L谷氨酸損傷+32ppb(32μmol/L)富氫水和200μmol/L依達(dá)拉奉聯(lián)合后處理組(GA+H32+ED組)、1mmol/L谷氨酸損傷+64ppb(64μmol/L)富氫水和200μmol/L依達(dá)拉奉聯(lián)合后處理組(GA+H64+ED組)。每組腦片按要求處理后進(jìn)行HE染色、免疫組織化學(xué)法測定TNF-α和NF-κB蛋白表達(dá)、尼氏染色進(jìn)行離體腦片存活神經(jīng)元計數(shù)。每張切片于光鏡下(×400)隨機選取5個不重疊視

4、野，進(jìn)行陽性細(xì)胞計數(shù)。
　　結(jié)果：谷氨酸損傷組NF-κB和TNF-α免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)與神經(jīng)元異常細(xì)胞數(shù)較對照組顯著增多(P﹤0.05)；富氫水或依達(dá)拉奉后處理組 NF-κB和TNF-α免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)均顯著下降，正常神經(jīng)元數(shù)量增多(P﹤0.05)；富氫水和依達(dá)拉奉聯(lián)合后處理組NF-κB和TNF-α免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)較單獨應(yīng)用富氫水或者依達(dá)拉奉均顯著下降，正常神經(jīng)元數(shù)量增多(P﹤0.05)；富氫水的保護(hù)作用可能與其濃度有關(guān)；64

5、μmol/L富氫水和200μmol/L依達(dá)拉奉聯(lián)合處理對谷氨酸損傷的離體腦片保護(hù)作用最好。
　　結(jié)論：離體腦片谷氨酸損傷后，富氫水和依達(dá)拉奉后處理通過抑制 NF-κB和TNF-α表達(dá)，減少炎癥相關(guān)因子的表達(dá)和釋放，減弱氧化應(yīng)激，抑制炎癥反應(yīng)，從而對神經(jīng)元的谷氨酸損傷發(fā)揮保護(hù)作用。
　　目的：通過富氫水和依達(dá)拉奉后處理對乳鼠離體腦片谷氨酸損傷保護(hù)作用的研究，進(jìn)一步探討兩者對腦缺血-再灌注損傷后NF-κB信號通路的影響。

6、　　方法：本實驗通過乳鼠離體腦片谷氨酸損傷建立腦缺血-再灌注損傷模型，研究富氫水和依達(dá)拉奉后處理對乳鼠離體腦片缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用并進(jìn)一步探討其對NF-κB信號通路的影響。體外培養(yǎng)SD乳鼠皮質(zhì)腦片至第六天，隨機分為對照組(Control，C組)、1mmol/L谷氨酸損傷組(Glutamic Acid，GA組)、NF-κB特異性抑制劑PDTC+1mmol/L谷氨酸損傷組(PDTC+GA組)、1mmol/L谷氨酸損傷+200μmol/

7、L依達(dá)拉奉后后處理組(GA+ED組)、PDTC+1mmol/L谷氨酸損傷+200μmol/L依達(dá)拉奉后后處理組(PDTC+GA+ED組)、1mmol/L谷氨酸損傷+64ppb(64μmol/L)富氫水后處理組(GA+H64組)、PDTC+1mmol/L谷氨酸損傷+64ppb(64μmol/L)富氫水后處理組(PDTC+GA+H64組)、1mmol/L谷氨酸損傷+64ppb(64μmol/L)富氫水和200μmol/L依達(dá)拉奉聯(lián)合后處理組

8、(GA+H64+ED組)、PDTC+1mmol/L谷氨酸損傷+64ppb(64μmol/L)富氫水和200μmol/L依達(dá)拉奉聯(lián)合后處理組(PDTC+GA+H64+ED組)。每組腦片按要求處理后進(jìn)行免疫組織化學(xué)法測定TNF-α和NF-κB蛋白表達(dá)、免疫熒光法觀察TNF-α和NF-κB蛋白表達(dá)及分布。每張切片于光鏡下(×400)隨機選取5個不重疊視野，進(jìn)行陽性細(xì)胞計數(shù)。
　　結(jié)果：谷氨酸損傷組NF-κB和TNF-α免疫組化和免疫熒光

9、陽性細(xì)胞數(shù)較對照組顯著增多(P﹤0.05)；聯(lián)用NF-κB特異性抑制劑PDTC組、富氫水或（和）依達(dá)拉奉后處理組NF-κB和TNF-α免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)較谷氨酸損傷組均顯著下降(P﹤0.05)，聯(lián)用PDTC各組較單純應(yīng)用富氫水或（和）依達(dá)拉奉后處理組NF-κB和TNF-α免疫組化和免疫熒光陽性細(xì)胞數(shù)有所減少但差別沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：富氫水和依達(dá)拉奉通過抑制 NF-κB炎癥相關(guān)信號通路中炎癥相關(guān)性因子NF-κB和TNF-α等