依達拉奉后處理對兔心肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：凋亡與心肌缺血再灌注損傷、心肌缺血預(yù)適應(yīng)和缺血后處理有著密切的聯(lián)系。缺血后處理尤其是藥物的缺血后處理對心肌缺血再灌注損傷的保護確切作用機制是目前研究的熱門課題。本實驗旨在通過依達拉奉后處理初步探討缺血后處理和藥物后處理在減輕心肌缺血再灌注損傷中的作用及其機制。 方法：建立在體新西蘭大白兔模型：新西蘭大白兔禁食12小時后，用30％的烏拉坦3ml/kg的劑量從兔的耳緣靜脈注射麻醉，待麻醉平穩(wěn)后，仰臥位固定于手術(shù)臺上。兔頸部常規(guī)

2、消毒，行氣管切開、氣管插管，接DH-140型動物呼吸機控制呼吸(呼吸頻率40次/min，潮氣量30ml,吸入氧濃度100％)。經(jīng)胸骨左緣3-4肋間開胸，小撐開器撐開，打開心包顯露心臟，觀察心臟跳動及其顏色，確保沒有異常。在左心耳根部下方穿帶有套管(減輕人為對血管壁的損傷)的線結(jié)扎冠狀動脈左前降支(LAD)。心電圖肢體導(dǎo)聯(lián)末端埋植于皮下以記錄心電圖ST段變化。結(jié)扎成功的標志為同步心電圖標準Ⅱ?qū)?lián)ST段抬高，QRS幅度升高及結(jié)扎線以下左心室

3、前壁出現(xiàn)發(fā)紺。分離右股靜脈(備抽血檢查用)。健康新西蘭大白兔24只，體重2.5-3.0kg，隨機分為三組。對照組(IR組)：全心缺血40min，再灌注60min；缺血后處理組(HCL組)：全心缺血40min，再灌注10s、缺血10s,反復(fù)3次后，再灌注59min：依達拉奉后處理組(YPC組)：全心缺血40min，灌注以3mg/kg的依達拉奉10min，然后再灌注50min。測定缺血前5min、再灌注30min及結(jié)束時冠脈流出液中肌酸激酶

4、同工酶(CK-MB)活性，再灌注結(jié)束即刻取左心室組織，測定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、ATP含量，采用流式細胞儀和間接免疫熒光法測定細胞中Bcl-2/Bax蛋白量，計算心肌細胞凋亡率，電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)，TUNEL法檢測細胞凋亡。 結(jié)果： 1．CK-MB活性的變化：在缺血前5minCK-MB活性，IR組(35.12±5.23)μ/ml，HCL組(35.2±5.28)μ/ml，YPC組(35.24

5、±5.43)μ/ml；再灌注30min，IR組(122.32±10.14)μ/ml，HCL組(65.34±6.28)μ/ml，YPC組(67.264±7.34)μ/ml ;再灌注結(jié)束時IR組(135.254±9.26)Nml，HCL組(69.674±6.78)μ/ml，YPC組(72.854±6.24)μ/ml。與缺血前5min比較，3組再灌注30min及結(jié)束時CK-MB活性升高(P＜0.05)；缺血前5min各組間比較差異無統(tǒng)計學意義

6、(P＞0.05);與IR組比較，YPC組和HCL組再灌注30min及結(jié)束時CK-MB活性降低(P＜0.05); YPC組和HCL組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 2.心肌組織SOD活性、MDA及ATP含量變化：再灌注結(jié)束時MDA含量，IR組(65.32±1：12.28)μmol/mg，HCL組(52.11±11.23)μmol/mg，YPC組(54.32±10.33)μmol/mg;SOD活性，IR組(57.24±10.

7、38)μmol/mg，HCL組(71.354±11.87)μmol/mg，YPC組(69.534±10.67)μmol/mg；ATP含量，IR組(3.004±0.42)μmol/mg，HCL組(4.214±0.53)μmol/mg，YPC組(4.374±0.64)μmol/mg。與IR組比較，再灌注結(jié)束時HCL組和YPC組的SOD活性、ATP含量升高，MDA含量降低(P＜0.05)。HCL組和YPC組上述指標比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0

8、.05)。 3.心肌組織中Bcl-2、Bax的含量和心肌細胞凋亡率變化：再灌注結(jié)束時Bcl-2的含量，IR組(FI=0.70±0.06)，HCL組(FI=0.984±0.04)，YPC組(FI=O.974±0.07)；Bax的含量，IR組(FI=1.65±0.15)，HCL組(FI=1.274±0.14)，YPC組(FI=1.214±0.14)；心肌細胞凋亡率，IR組(19.75±1.81)％，HCL組(10.46±0.91)％

9、，YPC組(9.684±0.59)％。IR組與瓜組比較，再灌注結(jié)束時HCL組和YPC組的Bcl-2的含量升高，Bax的含量降低(P＜0.05)，心肌細胞凋亡率明顯下降(P＜0.05)。HCL組和YPC組上述指標比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 4.心肌的超微結(jié)構(gòu)：IR組心肌細胞肌絲大片溶解，z線斷裂，線粒體內(nèi)室腫脹，部分線粒體發(fā)生嵴溶或崩解。HCL組心肌細胞肌絲排列整齊，z線清晰，線粒體輕度腫脹，核染色質(zhì)分布較均勻。YPC

10、組心肌細胞肌絲排列整齊，z線清晰，線粒體輕度腫脹，嵴排列較紊亂，核染色質(zhì)分布較均勻。 5.心肌細胞凋亡：IR組TUNEL染色陽性細胞明顯多于HCL組和YPC組，而HCL組和YPC組沒有顯著差別。 結(jié)論： 1.依達拉奉后處理和缺血后處理可能都是通過減少氧化劑介導(dǎo)的細胞損傷和細胞能量消耗來減少細胞凋亡，從而減輕心肌缺血再灌注損傷。 2依達拉奉后處理和缺血后處理可能通過上調(diào)Bcl-2蛋白的表達，下調(diào)Bax蛋白的