亞低溫預(yù)處理對谷氨酸誘導(dǎo)原代鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護作用.pdf

1、目的：觀察亞低溫預(yù)處理對體外培養(yǎng)鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞類缺血-再灌注損傷的保護作用；探討亞低溫保護作用與亞低溫聯(lián)合藥物預(yù)處理保護作用相比較。
　　方法：取生后24h之內(nèi)的新生SD乳鼠的腦皮質(zhì)細(xì)胞，體外培養(yǎng)至第三天，用含2.5ug/ml阿糖胞苷培養(yǎng)基換液一次,抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及纖維細(xì)胞生長，培養(yǎng)至第七天隨機分為五組：A組（實驗對照組），B組（谷氨酸損傷組），C組（亞低溫預(yù)處理組），D組（亞低溫聯(lián)合依達拉奉預(yù)處理組），E組（亞低溫聯(lián)合丙泊酚預(yù)

2、處理組）。C、D和E組分別予以亞低溫、亞低溫聯(lián)合依達拉奉和亞低溫聯(lián)合丙泊酚預(yù)處理。24h后B、C、D和E組予以200μmol/L谷氨酸損傷0.5h，所有分組換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h后觀察指標(biāo)。觀察指標(biāo)為HE染色后顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)變化和透視電鏡下細(xì)胞器的改變、細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞存活率（MTT法）、乳酸脫氫酶（LDH）漏出率、c-fos蛋白。
　　結(jié)果：1. HE染色后正置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)變化:A組大部分細(xì)胞形態(tài)基本正常，胞漿呈淡紅色

3、，核呈藍(lán)色；極少數(shù)細(xì)胞胞漿呈深紅色，核呈藍(lán)黑色，核固縮。B組可見較多細(xì)胞胞漿呈深紅色，核呈藍(lán)黑色，核固縮，軸突皺縮明顯，有的突起斷裂,細(xì)胞數(shù)量明顯減少。C、D和E組，均細(xì)胞數(shù)量減少不明顯，細(xì)胞基本聯(lián)成網(wǎng)狀；可見少量細(xì)胞胞漿呈深紅色，核呈藍(lán)黑色，核固縮，呈凋亡狀態(tài)。2.透射電鏡下細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變：A組神經(jīng)細(xì)胞膜完整，線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)完好；B組細(xì)胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量明顯減少，線粒體出現(xiàn)嚴(yán)重腫脹、嵴消失，呈空泡樣或固縮,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴(yán)重擴張

4、，核膜局部可見囊樣改變、溶解、斷裂，染色質(zhì)濃縮、邊聚；C、D和E組病理改變較B組明顯減輕。3.細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞存活率（MTT法）、乳酸脫氫酶（LDH）漏出率、c-fos蛋白結(jié)果類似：各預(yù)處理組與B組比較，差異有非常顯著性（P均＜0.01）；C組與D組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；C組與E組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：亞低溫預(yù)處理對離體大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞的谷氨酸損傷有保護作用。亞低溫聯(lián)合丙泊酚預(yù)處理組