黃芪對缺血缺氧及谷氨酸所致神經(jīng)毒性損傷作用的研究.pdf

1、現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),黃芪富含黃芪皂甙、黃芪多糖、異黃酮類化合物及硒元素,富含21種氨基酸,參與機體的多種代謝,具有廣泛的藥理作用。臨床上用于增強機體免疫力、利尿、抗衰老、護(hù)肝、降壓、強心、擴(kuò)張冠狀血管及全身末梢血管、抗菌、抗病毒等。此外臨床實踐證明,黃芪不僅對體虛感冒、慢性腎炎等具有較好的防治作用,還是中風(fēng)患者的良藥。不少中風(fēng)病人在恢復(fù)期及后遺癥期,從中醫(yī)的角度看,其表現(xiàn)是“本虛”為主,兼有標(biāo)實,出現(xiàn)一側(cè)肢體軟弱無力、容易疲勞、胃口差、

2、口淡、多汗、解大便不順暢等氣虛癥狀,?？蛇x用黃芪進(jìn)行治療,以達(dá)到“扶正祛邪”的目的。但黃芪對腦血管疾病的具體作用機制尚不明了。探索黃芪對神經(jīng)元的作用及其對缺血缺氧及興奮性氨基酸谷氨酸的毒性的影響，明確黃芪的作用機制，必將為臨床應(yīng)用黃芪來防治腦血管疾病提供有價值的理論依據(jù)。
　　目的：研究黃芪注射液對體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的影響；探索缺血缺氧對海馬神經(jīng)元的損傷作用及黃芪對抗缺血缺氧損傷的機制；探索谷氨酸對海馬神經(jīng)元的損傷作用及黃芪的保

3、護(hù)機制。
　　方法：在體外培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)元,實驗組加入不同濃度的黃芪,觀察黃芪對培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的量效作用，應(yīng)用MTT法檢測神經(jīng)元存活率作為反應(yīng)指標(biāo)；通過運用無糖DMEM培養(yǎng)基、去除培養(yǎng)液中的血清外加N2取代O2造成神經(jīng)元缺血缺氧細(xì)胞損傷模型,加入最適劑量的黃芪，觀察黃芪對上述損傷的作用；通過MTT法測定存活細(xì)胞數(shù)，乳酸脫氫酶(LDH)漏出量的檢測，BDNF，NGF及NT-3免疫細(xì)胞化學(xué)染色等檢測指標(biāo)來反映缺血缺氧對神經(jīng)元的

4、損傷作用，同時觀察黃芪對抗損傷的機制。通過在培養(yǎng)液中加入谷氨酸，對神經(jīng)元造成興奮毒性損傷，觀察黃芪對其的影響。
　　結(jié)果：適宜劑量黃芪可提高體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的存活率,其最適宜濃度為300g/L；大劑量的黃芪（超過800g/L）可對體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元造成毒副作用，使得神經(jīng)元存活率下降；缺血缺氧可導(dǎo)致海馬神經(jīng)元胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷，導(dǎo)致LDH外漏增加；缺血缺氧損傷可導(dǎo)致大量神經(jīng)元死亡，這其中包括壞死和凋亡；在BDNF，NGF及

5、NT-3三種神經(jīng)營養(yǎng)因子中，BDNF受缺血缺氧的影響最大，表現(xiàn)為其表達(dá)明顯下調(diào)。黃芪可對抗缺血缺氧損傷而保護(hù)神經(jīng)元，它可減輕神經(jīng)元脂質(zhì)過氧化并抑制缺血缺氧引發(fā)的BDNF表達(dá)下調(diào)。1mmol/L的谷氨酸引發(fā)的神經(jīng)興奮毒性作用可導(dǎo)致大量海馬神經(jīng)元死亡。免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，谷氨酸作用下海馬神經(jīng)元大量表達(dá)促凋亡蛋白Bax，說明谷氨酸的神經(jīng)毒作用與其誘導(dǎo)凋亡相關(guān)；在培養(yǎng)液中提前12h加入黃芪，可明顯降低谷氨酸的神經(jīng)毒作用，下調(diào)Bax的表達(dá)保護(hù)神