p53和血管抑素基因共轉(zhuǎn)染抑制SGC7901細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 觀察以pVITR02質(zhì)粒為載體共轉(zhuǎn)染野生型p53和血管抑素基因?qū)θ宋赴┘?xì)胞系SGC7901生長(zhǎng)的影響，探討聯(lián)合基因治療胃癌的可能性。 方法: 用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pVITR02-p53-AS轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞系SGC7901。應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞目的基因的表達(dá)，通過(guò)細(xì)胞集落形成試驗(yàn)、MTT生長(zhǎng)曲線、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和Annexin V凋亡蛋白，觀察p53和AS共轉(zhuǎn)染后對(duì)SGC7901生長(zhǎng)和凋亡的

2、影響。采用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1.RT-PCR結(jié)果證實(shí)p53和AS共轉(zhuǎn)染后能在SGC7901細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)。 2.細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)顯示： 目的基因轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞集落形成數(shù)均少于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05)；與單基因轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較，雙基因共轉(zhuǎn)染組明顯少于單基因轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。 3、MTT細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖： 單獨(dú)轉(zhuǎn)染p53、AS基因及共轉(zhuǎn)染p53-AS基因的細(xì)

3、胞生長(zhǎng)與空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞比較均變慢，倍增時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)。雙基因共轉(zhuǎn)染組對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制高于單基因轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。 4、流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期分析顯示： 比較轉(zhuǎn)染p53、AS、p53-AS后的細(xì)胞，細(xì)胞周期分析均可見(jiàn)細(xì)胞不同程度滯留于G1/S期。與單基因轉(zhuǎn)染組相比，雙基因共轉(zhuǎn)染組G1/S期的比例最大(P<0.05)，提示p53-AS基因抑制SGC7901細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)具有協(xié)同作用。 5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞

4、凋亡峰和Annexin V凋亡蛋白顯示： 在轉(zhuǎn)染p53、AS和共轉(zhuǎn)染p53-AS的細(xì)胞中，，均出現(xiàn)不同程度的凋亡峰，凋亡率高于轉(zhuǎn)染空載體組，雙基因共轉(zhuǎn)染組高于單基因轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。轉(zhuǎn)染p53、AS、p53-AS組中凋亡蛋白高于轉(zhuǎn)染空載體組(P<0.05)。雙基因共轉(zhuǎn)染組凋亡蛋白高于單基因轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。 結(jié)論: p53和AS基因具有協(xié)同抑制SGC7901細(xì)胞生長(zhǎng)、共同促進(jìn)細(xì)胞凋亡等作用，提示聯(lián)合基