恩度靶向腫瘤微環(huán)境對Lewis肺癌小鼠的影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 本文通過研究恩度（endostar，rhEndostatin重組人內(nèi)皮抑素）對C57BL/6小鼠皮下種植瘤模型免疫微環(huán)境MDSCs(myeloid-derived suppressor cells，髓源抑制性細(xì)胞)、TregFoxp3（Foxp3調(diào)節(jié)性T細(xì)胞），STAT3(signal transducerand activator of transcription3，轉(zhuǎn)錄信號(hào)傳導(dǎo)子與激活子3)、HIF-1α(乏氧

2、誘導(dǎo)因子-1α)、VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）mRNA及IL-10、TGF-β1、IL-12細(xì)胞因子表達(dá)的影響，探討恩度能否減輕腫瘤微環(huán)境的免疫抑制及相關(guān)機(jī)制，從而為恩度的臨床應(yīng)用提供新的理論支持。
　　 方法:
　　 (1) Lewis肺癌細(xì)胞培養(yǎng):注意觀察細(xì)胞的狀態(tài)和數(shù)量，及時(shí)換液和傳代。待細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期后，用于實(shí)驗(yàn)。
　　 (2)采用左上肢腋下皮下注射的方法建立C57BL/6小鼠皮下種植瘤模型，將荷瘤小

3、鼠隨機(jī)分為PBS（磷酸鹽緩沖液）對照組和恩度用藥組，分別進(jìn)行干預(yù)。干預(yù)方式為對照組給予PBS，0.2ml/只，恩度用藥組給予恩度注射液的劑量為20mg/kg/d，0.2ml/只，連用15天。隔兩日稱重、測量瘤徑以觀察荷瘤小鼠的體重、腫瘤體積的變化情況。末次干預(yù)24h后處死小鼠，剝?nèi)×鼋M織用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　 (3)流式細(xì)胞術(shù)檢測荷瘤小鼠腫瘤組織中MDSC、TregFoxp3的表達(dá);半定量RT-PCR及real-time PCR檢

4、測腫瘤組織中STAT3 mRNA、HIF-1α mRNA、VEGFmRNA的表達(dá);ELISA法檢測腫瘤組織上清液中IL-10、TGF-β1、IL-12的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 (1) PBS對照組和恩度用藥組小鼠體重均增加，恩度用藥組小鼠體重較對照組小鼠增加的少，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (2) PBS對照組和恩度用藥組小鼠腫瘤體積均增大，對照組小鼠腫瘤體積較恩度用藥組增大明顯，差異有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (3)與PBS對照組相比，恩度用藥組小鼠MDSC表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (4)與PBS對照組相比，恩度用藥組腫瘤組織中TregFoxp3表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (5)與PBS對照組相比，恩度用藥組STAT3、HIF-1α、VEGF mRNA表達(dá)減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (6)與PBS對照組相比

6、，恩度用藥組腫瘤組織上清液中IL-10、TGF-β1降低，IL-12升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 恩度的作用機(jī)制推測如下:①恩度改善乏氧、降低HIF-1α的表達(dá)，靶向STAT3減少VEGF的表達(dá)，從而減少腫瘤血管生成，減少轉(zhuǎn)移;②恩度通過改善腫瘤微環(huán)境，降低MDSC的比例，直接或間接下調(diào)TregFoxp3的表達(dá)，減輕免疫抑制;③減少抑制性細(xì)胞因子IL-10、TGF-β1的分泌，減輕對腫瘤浸