2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分高鐵和低鐵環(huán)境對成骨細胞生物活性影響的比較研究
  目的:觀察成骨細胞(hFOB1.19)在高鐵環(huán)境、低鐵環(huán)境培養(yǎng)后,細胞生物活性指標的變化趨勢,比較兩種培養(yǎng)環(huán)境對成骨細胞生物學活性的影響。
  方法:成骨細胞(hFOB1.19)常規(guī)培養(yǎng),培養(yǎng)基分別加入50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L濃度枸櫞酸鐵銨(FAC)構成高鐵培養(yǎng)環(huán)境;同樣,分別加入5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L去鐵

2、胺(DFO)構成低鐵培養(yǎng)環(huán)境。各組培養(yǎng)不同時間后,檢測成骨細胞生物活性指標:細胞內(nèi)的鐵離子、細胞增殖活性、堿性磷酸酶活性、細胞凋亡、鈣結節(jié)染色、Ⅰ型膠原(COL1)和骨鈣素(OC)的基因及蛋白表達。對照組加入去離子水。
  結果:在FAC組,隨FAC的濃度增加,細胞內(nèi)的鐵離子逐漸增加,成骨細胞增殖、分化、礦化、Ⅰ型膠原(COL1)和骨鈣素(OC)的基因和蛋白表達指標呈劑量依賴性減低;在DFO組,隨DFO的濃度增加,細胞內(nèi)的鐵離子逐

3、漸減少,小劑量的DFO可促進成骨細胞上述生物活性指標,大劑量的DFO則抑制上述指標。
  結論:高鐵培養(yǎng)環(huán)境對成骨細胞生物活性具有抑制作用,呈劑量依賴性,低鐵培養(yǎng)環(huán)境對成骨細胞生物活性存在雙重劑量效應:適當?shù)牡丸F環(huán)境對成骨細胞生物活性具有促進作用,但嚴重的低鐵環(huán)境對成骨細胞生物活性也具有一定的抑制作用。一定范圍的鐵濃度可使成骨細胞生物活性達到最佳狀態(tài)。
  第二部分高鐵環(huán)境對成骨細胞生物活性影響的相關機制研究
  目的

4、:研究高鐵環(huán)境對成骨細胞生物活性作用的相關機制。
  方法:34℃條件下體外培養(yǎng)人成骨細胞(hFOB1.19),以不同濃度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)枸櫞酸鐵銨(FAC)干預,用RT-PCR檢測成骨細胞鐵調(diào)節(jié)基因膜轉鐵蛋白1(FPN1)、轉鐵蛋白受體(TfR)和二價金屬轉運蛋白1(DMT1)的表達變化;流式細胞儀檢測成骨細胞活性氧(ROS)水平;丙二醛(Maleic Dialdehyde,MDA)、

5、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)試劑盒檢測成骨細胞MDA含量及SOD、GSH-PX活性;為進一步明確氧化應激在其中的意義,同時用2.5mmol/L抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)干預,再次用流式細胞儀檢測各組細胞內(nèi)活性氧(ROS)的水平,CCK-8法檢測各組細胞活力,RT-PCR法檢測各組細胞OPG、OC和COL1 m

6、RNA表達的變化,堿性磷酸酶活性試劑盒檢測各組細胞堿性磷酸酶活性。
  結果:FAC干預后,F(xiàn)PN1 mRNA的表達隨FAC干預濃度增加呈劑量依賴性上調(diào),TfR、DMT1 mRNA的表達呈劑量依賴性下調(diào)(P<0.05);成骨細胞ROS水平隨FAC干預濃度增加呈劑量依賴性升高(P<0.05);成骨細胞脂質(zhì)過氧化物MDA水平呈劑量依賴性升高,成骨細胞抗氧化物酶 SOD及 GSH-PX活性呈劑量依賴性降低(P<0.05);進一步加入NA

7、C后分組觀察,不同干預組成骨細胞內(nèi)活性氧含量差異顯著不同(P<0.05),F(xiàn)AC組顯著高于對照組,F(xiàn)AC+NAC組低于 FAC組、高于 NAC組;各組間活性氧含量的變化與成骨細胞活力、OPG、OC和COL1 mRNA表達、堿性磷酸酶活性呈負相關性,組間比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。
  結論:鐵過載對成骨細胞生物活性有明顯抑制作用,其機制可能與細胞內(nèi)鐵離子濃度增加后導致的氧化應激損傷有關。
  第三部分高鐵環(huán)境對成骨細胞

8、和破骨細胞分化的影響
  目的:了解高鐵培養(yǎng)環(huán)境對成骨細胞和破骨細胞分化的影響。
  方法:37℃條件下體外培養(yǎng)以小鼠前成骨樣細胞MC3T3-E1,在10mmol/lβ-甘油磷酸和50μg/ml抗壞血酸的誘導分化的作用下,分化為成骨細胞,同時用不同濃度(50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l)枸櫞酸鐵銨(FAC)干預,用RT-PCR檢測成骨細胞分化基因成骨相關轉錄因子(Runx2)、鋅指結構轉錄因子(Ost

9、errix)、骨唾液酸蛋白(BSP)和骨鈣素(OC)的表達,堿性磷酸酶活性試劑盒檢測細胞堿性磷酸酶活性;37℃條件下體外培養(yǎng)以小鼠單核細胞 RAW264.7,在20ng/ml核因子κB受體活化因子配體(RANKL)的誘導分化的作用下,分化為破骨細胞,同時用不同濃度(12μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)枸櫞酸鐵銨(FAC)干預,CCK-8法檢測細胞活力,抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)觀察TRAP陽性細胞形成情況并計數(shù)

10、,RT-PCR檢測破骨細胞分化基因抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、組織蛋白酶 K(CTK)和金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達。
  結果:成骨細胞分化相關基因的表達隨FAC干預濃度的增加呈劑量依賴性下調(diào)(P<0.05),成骨細胞ALP水平隨FAC干預濃度的增加呈劑量依賴性降低(P<0.05)。TRAP陽性細胞的數(shù)量隨FAC干預濃度的增加而增加(P<0.05),破骨細胞分化相關基因的表達隨FAC干預濃度的增加呈劑量依賴性上調(diào)(P<

11、0.05)。
  結論:高鐵培養(yǎng)環(huán)境明顯抑制小鼠前成骨樣細胞MC3T3-E1向成骨細胞分化,明顯促進小鼠單核細胞RAW264.7向破骨細胞分化。
  第四部分鐵過載對去勢大鼠骨代謝的影響
  目的:觀察高鐵干預后去勢大鼠體內(nèi)鐵代謝與骨代謝的變化,探討鐵過載對去勢大鼠骨代謝的影響。
  方法:將32只3月齡雌性SD大鼠隨機分為假手術組(Sham)、去勢組(OVX)、OVX+FAC低劑量組(FAC1)、OVX+FAC

12、中劑量組(FAC2)和 OVX+FAC高劑量組(FAC3)。去勢后1周,F(xiàn)AC1、FAC2和FAC3組分別按45、90、180mg/kg腹腔注射,每周2次,OVX組和 Sham組按同樣方式和頻次給予等量生理鹽水。干預9周后處死取材,生化法測血清鐵離子含量,電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀ICP法測定大鼠左側脛骨鐵含量, Perl’s法對肝臟切片進行鐵染色觀察, Micro-CT對股骨遠端進行三維圖像分析,骨組織切片行HE染色觀察,酶聯(lián)免疫吸附

13、法(ELISA)測定血清β-Ⅰ型膠原羧基端肽(β-CTX)和骨鈣素(BGP)的含量。
  結果:與Sham組比較,OVX組血清鐵和脛骨鐵含量明顯降低(P<0.05);與OVX組比較,F(xiàn)AC1組、FAC2組和FAC3組血清和脛骨鐵隨FAC干預濃度的增加明顯升高,組間比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05);FAC1組、FAC2組和FAC3組肝臟染色明顯可見藍染鐵顆粒;Micro-CT結果顯示,與Sham組相比,OVX組骨小梁變疏松,F(xiàn)AC1

14、組、FAC2組和FAC3組隨FAC干預濃度的增加骨小梁更加疏松、連續(xù)性下降,空隙率增加;骨組織病理切片染色顯示Sham組大鼠骨小梁飽滿,形態(tài)結果完整,排列緊密有序成網(wǎng)狀;OVX組骨小梁較為稀疏,小梁間隙增大;FAC1組、FAC2組和FAC3組隨FAC干預濃度的增加骨小梁更加稀疏,變細、變薄,有扭曲或斷裂;ELISA結果顯示,與Sham組比較,OVX組、FAC1組、FAC2組和FAC3組BGP和CTX的水平均明顯升高(P<0.05),但B

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