鴨瘟病毒熒光定量PCR檢測方法的建立及其強弱毒株UL2基因差異分析.pdf

1、鴨瘟又稱鴨病毒性腸炎，是由鴨腸炎病毒引起的常見于鴨、鵝及其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性、高度接觸性傳染病。該病是一種泛嗜性感染的疾病，感染后發(fā)病率及死亡率都很高，給我國的水禽養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失，嚴(yán)重制約了我國水禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。鴨瘟病毒基因組龐大，雖然GenBank中已經(jīng)發(fā)表了幾個毒株的全基因組序列，但針對各基因的相關(guān)研究分析依然很少。
　　本試驗從山東高青某鴨場的發(fā)病鴨中分離到一株病毒，經(jīng)PCR鑒定和動物回歸試驗確定

2、為鴨瘟病毒。根據(jù)GenBank中已發(fā)表的DEV基因組序列，設(shè)計合成了一對擴增UL2基因的特異性引物，分別提取該DEV高青分離株和實驗室保存的另一DEV強毒泰安株的基因組DNA后，對UL2基因進行了擴增、克隆及序列測定，并與GenBank中已發(fā)表的鴨瘟病毒序列進行比較。序列分析結(jié)果顯示，這兩個毒株的UL2基因都與已發(fā)表的DEV強毒序列有相同的特征，而與中國疫苗株VAC株和Clone-03株等弱毒株存在較大的差異，弱毒株的UL2基因都缺失了

3、一個528bp的大片段。這表明該DEV高青分離株具有強毒株的基因型特征，提示弱毒株中UL2基因所發(fā)生的大片段缺失很可能與病毒的毒力減弱直接相關(guān)。
　　之后我們選取鴨瘟病毒相對保守的UL44基因序列，利用Premier5.0軟件設(shè)計合成一對熒光定量PCR引物，并對目的基因片段進行擴增、克隆，構(gòu)建出鴨瘟病毒目的基因的陽性標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，成功建立了檢測DEV的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法。該方法檢測靈敏度可達2.7×101個拷貝，