足細(xì)胞損傷在腎小球硬化中的作用.pdf

1、腎小球足細(xì)胞位于腎小球基底膜外側(cè)，是腎小球?yàn)V過(guò)屏障重要組成部分。在生理狀態(tài)下，不僅足細(xì)胞參與了濾過(guò)屏障對(duì)蛋白質(zhì)的選擇性濾過(guò)的作用，而且還參與維持腎小球毛細(xì)血管袢功能和結(jié)構(gòu)的正常。在病理狀態(tài)下：足細(xì)胞受損不僅可導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生，而且還與腎小球硬化形成密切相關(guān)。早期大量的形態(tài)學(xué)證據(jù)表明：足細(xì)胞的損傷在光鏡下，表現(xiàn)為細(xì)胞的肥大、變性、脫落和細(xì)胞數(shù)的減少，電鏡表現(xiàn)為足突的融合等改變。而這些改變也是局灶性腎小球硬化(FSGS)的早期病變。近來(lái)的研

2、究證實(shí)：足細(xì)胞損傷是FSGS的始動(dòng)環(huán)節(jié)。對(duì)于這些組織形態(tài)學(xué)改變的原因及其形成機(jī)制目前國(guó)內(nèi)、外的研究較多但所知甚少。由于腎小球足細(xì)胞是終末分化的細(xì)胞，不具有增值、分化的特性，其脫落損傷具有不可逆性，而且蛋白尿不僅是腎小球?yàn)V過(guò)屏障受損的標(biāo)志，也是各種腎小球疾病患者腎臟慢性失功的重要原因。在臨床上所有原發(fā)和繼發(fā)性腎小球疾病，包括特發(fā)性FSGS，糖尿病腎病、狼瘡性腎炎，IgA腎炎等均可表現(xiàn)為FSGS樣的病理過(guò)程。雖然FSGS病變逐漸進(jìn)展的過(guò)程均

3、伴有腎小球足細(xì)胞數(shù)目逐漸減少的病理過(guò)程，但腎小球硬化進(jìn)展的速度和程度完全不同。因此，研究足細(xì)胞損傷的過(guò)程對(duì)于闡明腎小球硬化和蛋白尿的發(fā)生機(jī)制具有重要的意義。 由于足細(xì)胞位于基底膜的外側(cè)，其損傷后很可能脫落而進(jìn)入尿液中。通過(guò)分析尿液足細(xì)胞的損傷特點(diǎn)而了解足細(xì)胞損傷在腎小球硬化中的作用。為此，我們?cè)诖_定了尿液足細(xì)胞及其其它有形成份的方法后系統(tǒng)地研究了足細(xì)胞排泄的臨床特征。以期詮釋足細(xì)胞損傷在腎小球疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。 本研

4、究由四部分組成：研究一、尿沉渣定量分析方法的評(píng)價(jià)及影響因素研究 目的：探討尿沉渣定量分析方法及其影響因素研究。 方法：病人的入選：選擇經(jīng)腎活檢確診的腎臟病患者以及腎移植患者共10例，比較顯微鏡尿沉渣鏡檢染色定量計(jì)數(shù)板和尿沉渣自動(dòng)定量測(cè)定儀(UF-100)對(duì)同一樣本中管型和上皮細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果；細(xì)胞染色采用改良巴氏染色；尿液細(xì)胞碎片的采用流式碘化丙啶染色檢測(cè)。 結(jié)果：流式細(xì)胞儀檢測(cè)尿沉渣中的管型和上皮細(xì)胞較顯微鏡鏡檢

5、結(jié)果分別增高8.83倍和5.83倍(P＜0.05)。對(duì)病人同一尿沉渣分別用HDF緩沖液，正常人尿液和患者尿液進(jìn)行懸浮并在4℃保存發(fā)現(xiàn)：隨留置時(shí)間的延長(zhǎng)，其上皮細(xì)胞數(shù)均逐漸減少(P＜0.05)。同時(shí)伴有細(xì)胞碎片率均逐漸增加。在8h和16h，用病人尿液處置的尿沉渣細(xì)胞碎片率均比HDF組高(P＜0.05)。在8h時(shí)，用正常人尿液處置尿沉渣的細(xì)胞碎片率較病人尿液處置組顯著減低(P＜0.05)。然而患者尿沉渣管型計(jì)數(shù)各組比較卻無(wú)顯著性差異(P＞0

6、.05)。患者尿沉渣(n=3)分別用HDF、丙酮、乙醇和多聚甲醛固定-20℃保存一周后進(jìn)行PI染色，其細(xì)胞碎片率分別為：31.6±6.4、66.4±2.7、49.6±1.45和65.9±3.4(％)。HDF和乙醇組細(xì)胞碎片率較低，丙酮和多聚甲醛均較高(P＜0.05)。 結(jié)論：采用熒光流式細(xì)胞儀和顯微鏡鏡檢定量計(jì)數(shù)對(duì)尿沉渣管型和上皮細(xì)胞的檢測(cè)存在顯著的差異。對(duì)尿沉渣管型和細(xì)胞成分的顯微鏡定量和定性檢測(cè)仍是主要確診手段。患者尿液中存

7、在更多損傷細(xì)胞的因素。尿樣本應(yīng)根據(jù)檢測(cè)要求的不同，采用不同的處理。 研究二、活足細(xì)胞脫落是腎小球損傷的方式 目的：探討足細(xì)胞的體外培養(yǎng)和尿液足細(xì)胞排泄的臨床意義。 方法：①對(duì)患者或正常健康人的尿沉渣進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，結(jié)合細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)行為和足細(xì)胞特異性單克隆抗體(podocalyxin)對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定；②入選腎臟病患者101例，其中男性46例，女性55例，平均年齡35.1±11.8(歲)，所有患者的診斷均經(jīng)病理

8、證實(shí)。10例健康志愿者為正常對(duì)照；③足細(xì)胞排泄的定量采用尿沉渣涂片免疫組化染色直接計(jì)數(shù)；④尿白蛋白/尿肌酐大于300(μg/mg)的腎小球腎炎患者定義為活動(dòng)性病變。 結(jié)果：①腎臟病患者尿沉渣中均可培養(yǎng)出足細(xì)胞，而正常人未能培養(yǎng)出足細(xì)胞。腎臟病患者足細(xì)胞培養(yǎng)的成功率和尿沉渣中尿液細(xì)胞podocalyxin免疫組化染色陽(yáng)性率均較健康人對(duì)照組高，但各種腎小球腎炎患者之間podocalyxin免疫組化染色陽(yáng)性率并未有明顯的差異；②活動(dòng)性

9、微小病變性腎炎，局灶節(jié)段性腎小球硬化和IgA腎炎患者其尿液足細(xì)胞排泄計(jì)數(shù)和占尿液小管上皮細(xì)胞總數(shù)的構(gòu)成比均顯著增加(P＜0.05)；③尿液細(xì)胞podocalyxin免疫組化染色陽(yáng)性患者的24h蛋白尿和尿液上皮細(xì)胞排泄較陰性組患者均明顯增加，血漿總蛋白和白蛋白水平顯著下降，但在年齡、性別和高血壓發(fā)生率以及SCr、血紅蛋白、膽固醇和甘油三酯水平二者均無(wú)明顯差異(P＞0.05)；④微小病變型腎小球腎炎患者尿液足細(xì)胞排泄與24蛋白尿水平密切相關(guān)

10、(r=0.746，P=0.030)。 結(jié)論：尿液脫落細(xì)胞中可以培養(yǎng)出足細(xì)胞，脫落的腎小球上皮細(xì)胞中尚有存活的足細(xì)胞；足細(xì)胞尿是腎小球疾病活動(dòng)的指標(biāo)，尿液足細(xì)胞脫落損傷與蛋白尿水平密切相關(guān)。這些證據(jù)表明：活腎小球細(xì)胞脫落是腎小球足細(xì)胞損傷的另一機(jī)制。 研究三、腎移植排斥患者尿液足細(xì)胞排泄的特征 目的：觀察腎移植患者尿液足細(xì)胞排泄的臨床特征。 方法：①入選腎移植患者31例，其中男性20例，女性11例，平均年齡

11、33.7±8.1歲(范圍22～55歲)，并將患者分為腎移植排斥組(n=15)、肺部感染組(n=7)、非排斥非感染組(n=14)和健康志愿者為正常對(duì)照(n=10)，15例腎移植排斥患者的診斷均經(jīng)腎活檢病理證實(shí)；②用podocalyxin單克隆抗體免疫組化染色鑒定足細(xì)胞；足細(xì)胞排泄的定量采用組化染色直接計(jì)數(shù)；③尿沉渣其他成份采用巴氏染色并用計(jì)數(shù)板進(jìn)行顯微鏡鏡下計(jì)數(shù)。 結(jié)果：腎移植排斥組、肺部感染組、非排斥非感染組和正常對(duì)照組足細(xì)胞尿

12、的發(fā)生率分別是：33.3％、28.6％、35.7％和0％，腎移植患者各組足細(xì)胞尿發(fā)生率和足細(xì)胞排泄水平無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，但均較正常對(duì)照組顯著增高(P＜0.05)。除此以外，腎移植排斥組患者尿液有形成份，包括尿液總細(xì)胞數(shù)、小管上皮細(xì)胞計(jì)數(shù)以及小管上皮細(xì)胞計(jì)數(shù)/尿肌酐值、白細(xì)胞、管型和粘液絲等與肺部感染組和非排斥非感染組患者比較均顯著增加(P＜0.05)，而肺部感染組和非排斥非感染組患者比較均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。腎移植患

13、者在移植后數(shù)小時(shí)表現(xiàn)為尿液中性粒細(xì)胞排泄增加，腎移植排斥表現(xiàn)為尿單個(gè)核細(xì)胞排泄增加，而非排斥非感染患者無(wú)明顯的細(xì)胞成份。 結(jié)論：尿液足細(xì)胞排泄不是腎移植排斥的鑒別指標(biāo)。尿液細(xì)胞和管型等有形成份的顯著增加是腎移植排斥的臨床特征。腎移植不同時(shí)期其尿液排泄成分的特征不同。 研究四、IgA腎病患者尿足細(xì)胞排泄的臨床病理特征 目的：探討IgA腎病患者尿足細(xì)胞排泄的臨床病理特征。 方法：①入選IgAN患者36例，其中

14、男性20例，女性16例，平均年齡34.1±12.2(歲)，所有患者的診斷均經(jīng)病理證實(shí)。10例健康志愿者為正常對(duì)照；②足細(xì)胞排泄的定量采用尿沉渣涂片免疫組化染色直接計(jì)數(shù)；③觀察尿液足細(xì)胞排泄與腎臟病理的關(guān)系。 結(jié)果：①I(mǎi)gAN患者尿沉渣中尿液細(xì)胞podocalyxin免疫組化染色陽(yáng)性率較健康人對(duì)照組高(P＜0.05)；②大量蛋白尿IgAN患者(≥3.0g/24h)，尿液足細(xì)胞檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)、尿液足細(xì)胞排泄數(shù)、足細(xì)胞與尿肌酐的比值以及足

15、細(xì)胞占尿液小管上皮的百分?jǐn)?shù)均較非大量蛋白尿IgAN患者(＜3.0g/24h)顯著增高(P＜0.05)。IgAN患者足細(xì)胞排泄水平與蛋白尿水平呈正相關(guān)(r=0.446，P=0.007)；③伴有足細(xì)胞尿的IgAN患者蛋白尿水平較無(wú)足細(xì)胞尿的患者顯著增高，血漿白蛋白水平顯著降低；腎小管上皮細(xì)胞與肌酐的比值亦顯著增高(P＜0.05)。但伴與不伴足細(xì)胞尿的IgAN患者在患者的年齡、性別、血壓、血Scr、血色素水平以及血漿脂質(zhì)代謝二者均無(wú)顯著性差異

16、(P＞0.05)。④尿足細(xì)胞的排泄與細(xì)胞或細(xì)胞纖維性新月體，小球血管襻腔狹窄和足突廣泛融合病變有關(guān)而與系膜、內(nèi)皮細(xì)胞病變、局灶基底膜增厚和腎小管病變無(wú)關(guān)。伴有足細(xì)胞尿的患者腎小球和腎小管間質(zhì)硬化更明顯(P＜0.05)。伴有新月體的患者其尿液足細(xì)胞排泄水平，尿液上皮細(xì)胞和管型的排泄均增加(P＜0.05)。 結(jié)論：足細(xì)胞尿不僅是IgAN患者腎小球損傷存在的直接證據(jù)，也是IgAN患者活動(dòng)性損傷的指標(biāo)。足細(xì)胞尿排泄的水平與蛋白尿水平顯著