版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討并驗(yàn)證線粒體功能改變和線粒體DNA突變?cè)讦亮W又录?xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用機(jī)制。
方法:⑴建立α粒子體外照射致人小氣道上皮細(xì)胞 (Small airway epithelial cells,SAEC)惡性轉(zhuǎn)化的模型。不同劑量(0.2、0.4、0.8、1.0、2.0Gy)α粒子分單次和多次照射SAEC細(xì)胞,平板克隆形成試驗(yàn)檢測(cè)不同劑量α粒子對(duì)SAEC細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)影響。細(xì)胞照射后常規(guī)培養(yǎng)于37℃,5[%] CO2培養(yǎng)箱中
2、,定期檢測(cè)細(xì)胞對(duì)血清和PALA的抵抗性以及細(xì)胞的增殖活性。同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞在軟瓊脂中的錨著獨(dú)立生長(zhǎng)能力,Transwell小室觀察細(xì)胞的侵襲特性,Western blot法測(cè)定癌基因c-myc和抑癌基因p53的蛋白表達(dá)。選擇具有惡性轉(zhuǎn)化特性的細(xì)胞接種裸鼠,觀察裸鼠體內(nèi)的成瘤情況。⑵檢測(cè)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中線粒體功能與線粒體DNA的突變情況。以12S rRNA擴(kuò)增線粒體DNA,18S rRNA(GAPDH)擴(kuò)增核DNA,Real-time PCR檢
3、測(cè)細(xì)胞的線粒體DNA相對(duì)拷貝數(shù)。采用巢式PCR聯(lián)合Real-time PCR檢測(cè)細(xì)胞線粒體的Common deletion缺失率。生化試劑盒和Western blot檢測(cè)細(xì)胞線粒體細(xì)胞色素C氧化酶(Cytochrome C Oxidase,COX)活性和蛋白的表達(dá)。JC-1熒光探針流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的線粒體膜電位。氧電極法檢測(cè)細(xì)胞的氧耗量情況。以軟瓊脂克隆形成率、c-myc為自變量,SPSS17.0軟件分析線粒體拷貝數(shù)、common d
4、eletion缺失率、COX活性、膜電位、氧耗量與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化程度的相關(guān)性。⑶通過大鼠吸入試驗(yàn)驗(yàn)證細(xì)胞的體外染毒結(jié)果。Wistar大鼠置于多功能生態(tài)氡室慢性吸入染毒,累積染毒劑量分別達(dá)100、200、400工作水平月(Working level month,WLM),組織病理學(xué)HE染色和masson膠原纖維染色觀察氡致大鼠肺組織的病理學(xué)改變。分離大鼠肺組織線粒體,生化試劑盒測(cè)定線粒體COX活性,并與病理學(xué)改變作相關(guān)分析。
5、結(jié)果:①細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)顯示隨α粒子照射劑量增大細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)逐漸降低,呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。照射后培養(yǎng)過程中,細(xì)胞逐漸出現(xiàn)轉(zhuǎn)化特性,血清抗性和PALA抗性以及細(xì)胞增殖活性顯著增加,出現(xiàn)生長(zhǎng)接觸抑制。首次照射后4個(gè)月,照射組細(xì)胞具備明顯的錨著獨(dú)立生長(zhǎng)能力,可形成軟瓊脂克隆,其中0.8Gy組克隆形成率最高,形成的克隆也最大。侵襲試驗(yàn)顯示照射組細(xì)胞侵襲能力明顯增強(qiáng),同時(shí)癌基因c-myc蛋白表達(dá)明顯升高,而野生型抑癌蛋白p53減少或消失,表明照射組細(xì)胞
6、已發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。裸鼠接種試驗(yàn),細(xì)胞接種后4個(gè)月,0.8Gy多次照射組5只裸鼠有3只在接種部位出現(xiàn)結(jié)節(jié),組織病理鑒定為上皮源性腫瘤。②Real-time PCR結(jié)果顯示各轉(zhuǎn)化組細(xì)胞線粒體拷貝數(shù)增加1.4-2.9倍,common deletion缺失率升高2.6-4.9倍。線粒體功能檢測(cè)顯示COX的整體活性下降,COX1和COX4的蛋白表達(dá)均降低,線粒體膜電位下降,細(xì)胞氧耗量降低。相關(guān)性分析顯示線粒體拷貝數(shù)、common deletion缺
7、失率、COX活性與軟瓊脂克隆形成率和c-myc表達(dá)之間呈有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的相關(guān)。③大鼠肺組織病理結(jié)果,與正常對(duì)照組相比,可見氡染毒組肺間質(zhì)充血水腫,肺泡間隔增厚,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),包括中性粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞等,肺組織逐漸發(fā)生纖維化,肺泡腔逐漸萎縮變小。軟件分析結(jié)果顯示肺泡間隔厚度逐漸增加,平均肺泡腔面積逐漸減少,COX活性測(cè)定結(jié)果顯示其活性隨著氡染毒劑量的增加逐漸降低。相關(guān)性分析顯示肺泡隔厚度與COX活性呈負(fù)相關(guān),而肺泡腔面積與COX活
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 線粒體損傷在NAFL大鼠肝細(xì)胞凋亡中的作用.pdf
- 線粒體DNA在α粒子致人支氣管上皮細(xì)胞體外惡性轉(zhuǎn)化中的作用.pdf
- 線粒體損傷在重癥休克中作用及虎杖苷治療.pdf
- 線粒體損傷在支氣管哮喘發(fā)生機(jī)制中的作用.pdf
- 鈣離子介導(dǎo)線粒體損傷在熱打擊誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用.pdf
- 足細(xì)胞損傷在腎小球硬化中的作用.pdf
- 線粒體損傷在膿毒癥導(dǎo)致膈肌功能障礙中的作用.pdf
- 鋁暴露致大鼠神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷在學(xué)習(xí)記憶障礙中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 線粒體損傷在NAFLD進(jìn)展中的作用機(jī)制以及姜黃素對(duì)其的影響.pdf
- ROS改變和線粒體損傷在PIG11高表達(dá)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡中的作用.pdf
- 氡-α粒子照射致肺支氣管細(xì)胞線粒體損傷及RNA表達(dá)改變.pdf
- 環(huán)境雌激素MEHP通過ROS介導(dǎo)的線粒體損傷在TRALI中的作用機(jī)制研究.pdf
- 肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷在高原肺水腫發(fā)生中的作用.pdf
- Notch信號(hào)通路在HBx致L02細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中作用機(jī)制的初步研究.pdf
- 炎性反應(yīng)在多壁碳納米管致胸膜間皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用.pdf
- 氧化損傷在肌萎縮側(cè)索硬化中的作用.pdf
- 氧化脅迫與線粒體在鎘誘導(dǎo)細(xì)胞損傷中的作用.pdf
- 苯醌誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞線粒體損傷及其在細(xì)胞凋亡中的作用.pdf
- 核受體應(yīng)答在阿特拉津致鵪鶉大腦線粒體損傷中的作用.pdf
- 鎘致HEK293細(xì)胞離體線粒體損傷的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論