SVCV感染EPC細胞microRNA表達譜的初步研究.pdf

1、MicroRNA(微小RNA)是廣泛存在于真核生物中的一類長約22 nt的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，在細胞凋亡、細胞增殖和分化及DNA修復等多種生理過程中都發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用。大量研究表明，miRNA還與病毒感染后引起細胞內(nèi)一系列生理變化相關(guān)。鯉春病毒血癥病毒(Spring Viremia of Carp Virus，SVCV)能引起鯉春病毒血癥(Spring Viremia of Carp，SVC)爆發(fā)，給世界水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損

2、失。目前，該病毒感染的致病機理還不清楚。為了研究miRNA在SVCV感染過程中的作用，本研究采用高通量測序技術(shù)對SVCV感染前后EPC細胞中的小RNA文庫進行測序。具體研究內(nèi)容如下:
　　1.構(gòu)建了病毒感染組小RNA文庫(E)和病毒未感染組小RNA文庫(M)，通過solexa測序技術(shù)和后續(xù)的生物信息學分析，對每一條小RNA序列進行分類注釋，鑒定出161個保守性miRNA和26個新的miRNA。
　　2.將M組和E組miRNA

3、表達水平進行了比較，發(fā)現(xiàn)SVCV感染導致10個miRNA表達上調(diào)和4個miRNA表達下調(diào)。
　　3.為了驗證高通量測序結(jié)果的準確性，通過qRT-PCR對部分miRNA表達水平進行了驗證。
　　4.利用生物學軟件對14個顯著性差異表達miRNA的靶基因進行了預測，還預測了可以直接靶向SVCV基因組的miRNA。
　　5.通過轉(zhuǎn)染miRNA抑制劑或模擬物，TCID50和qRT-PCR等實驗對miR-15a-5p與SVCV復