PGC-1β基因調(diào)控肉雞腹脂沉積與雞前體脂肪細(xì)胞脂質(zhì)沉積的分子機(jī)制研究.pdf

1、脂肪組織在動物機(jī)體維持生命、生長和繁殖過程中起著至關(guān)重要的作用。PGC-1β基因作為脂肪細(xì)胞分化標(biāo)記基因PPARγ的輔助激活物，可通過輔助激活眾多轉(zhuǎn)錄因子而發(fā)揮作用，已有很多研究證明其與脂肪形成有密切關(guān)系，然而在脂肪沉積這個由眾多關(guān)鍵基因與信號通路參與調(diào)節(jié)的復(fù)雜過程中，其作用機(jī)理尚不清楚，并且在家禽上研究較少。家禽脂肪沉積與家禽肉質(zhì)變化、肥胖等代謝性疾病的發(fā)生有著緊密的聯(lián)系，而家禽的脂肪沉積主要靠脂肪細(xì)胞的分化增殖而完成，因此，針對家禽

2、脂肪沉積的研究不僅對家禽的育種有重要意義，同時對人類代謝疾病治療也有借鑒作用。
　　本試驗采用階梯式活體采食量、采集并誘導(dǎo)雞前體脂肪細(xì)胞分化、構(gòu)建大腸桿菌質(zhì)粒干擾載體并處理雞原代脂肪細(xì)胞等技術(shù)，研究P GC-1β基因?qū)θ怆u活體脂肪沉積和雞脂肪細(xì)胞中脂代謝的影響及其調(diào)控機(jī)制。
　　以AA肉雞為試驗材料，通過改變機(jī)體采食量(110％、100％、90％)并飼喂肉雞到70日齡，利用Rea1-time PCR檢測分析肝臟與腹脂中PGC

3、-1β和脂肪代謝相關(guān)基因（PPARγ、 C/EBPα、SREBP-1c、FAS與A-FABP）的mRNA在采食量變化時的表達(dá)模式及變化情況，以研究肉雞PGC-1β基因表達(dá)量變化與活體脂肪沉積的關(guān)系。結(jié)果表明:(1)試驗雞體重增長與腹脂沉積量隨著試驗雞采食量的下降而相應(yīng)的變化;(2)腹脂中PPARγ(28d、70d)、SREBP-1c(70d)與FAS(70d)的mRNA表達(dá)量隨飼喂量的增加而顯著升高，而A-FABP(28d、49d、70

4、d)的mRNA表達(dá)量隨飼喂量升高而顯著降低;肝臟中PPARγ(70d)、SREBP-1c(70d)與FAS(70d)的mRNA表達(dá)量隨飼喂量增加而顯著增加;(3)腹脂中PGC-1β(70d)的mRNA表達(dá)量隨飼喂量的增加而升高，肝臟中PGC-1(49d、70d)的mRNA表達(dá)量隨飼喂量的增加而升高。
　　以14d AA肉雞為材料，收集并誘導(dǎo)雞原代前脂肪細(xì)胞分化，采用油紅O檢測鑒定誘導(dǎo)分化后雞前體脂肪細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;采用Real-

5、time PCR檢測分析PGC-1β與分化標(biāo)志基因(PPARγ、 C/EBPα)的mRNA變化情況，研究PGC-1β基因在雞脂肪細(xì)胞分化過程中的表達(dá)規(guī)律。結(jié)果表明:(1)油酸誘導(dǎo)后的家禽前脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化符合動物脂肪細(xì)胞分化典型特征，初期生成小脂滴，隨分化程度加深，脂滴聚集在一起并存儲在成熟脂肪細(xì)胞內(nèi);(2) PPARγ的mRNA表達(dá)量在分化初期迅速上升，而C/EBPα的mRNA表達(dá)量則在分化后期上升;(3) PGC-1β隨分化程度加

6、深，表達(dá)量逐漸上升。
　　通過構(gòu)建PGC-1β的大腸桿菌質(zhì)粒干擾載體并轉(zhuǎn)染雞原代脂肪細(xì)胞，采用油紅O染色法檢測鑒定轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞內(nèi)甘油三酯積累的變化;CCK-8細(xì)胞增殖檢測法檢測分析轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖情況;Real-time PCR法分析PGC-1β與脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因（PPARγ、 C/EBPα、SREBP-1c、FAS與A-FABP）的mRNA表達(dá)變化，研究PGC-1β基因表達(dá)量變化對雞脂肪細(xì)胞分化的影響。結(jié)果表明:

7、(1)轉(zhuǎn)染后，脂肪細(xì)胞內(nèi)PGC-1β基因的mRNA與蛋白表達(dá)量顯著下調(diào);(2) PGC-1β基因表達(dá)量下調(diào)后，細(xì)胞從形態(tài)學(xué)上看分化程度弱于對照組，且細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量顯著低于對照組;(3) PGC-1β基因表達(dá)量下調(diào)后，細(xì)胞增殖并不會受到顯著影響;(4) PGC-1β基因表達(dá)量下調(diào)后，PPARγ、 SREBP-1c與FAS的mRNA表達(dá)量顯著下降。
　　綜上所述，不同飼喂量顯著影響了肉雞體重及體脂沉積，PGC-1β基因參與肉雞脂肪