Kupffer細(xì)胞極化參與BPA導(dǎo)致的肝臟脂質(zhì)沉積.pdf

1、目的：雙酚A（Bisphenol A，BPA）作為最常見的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物之一，可以促進(jìn)肝臟的脂質(zhì)沉積，但具體機(jī)制尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn)Kupffer細(xì)胞（Kupffer cells，KCs）通過向促炎的M1型極化可以促進(jìn)肝臟產(chǎn)生慢性炎癥，最終導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)沉積，但其是否參與BPA所致的肝臟脂質(zhì)沉積，目前仍不清楚。本研究旨在探索KCs極化在BPA所致的肝臟脂質(zhì)沉積中的作用。
　　方法：在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，分別用不同濃度BPA（5、50、500

2、μg/kg/day）喂養(yǎng)CD1小鼠8周后，用化學(xué)酶促-比色法檢測肝臟甘油三酯（TG）含量，油紅O染色觀察肝臟內(nèi)脂質(zhì)聚集情況、定量PCR檢測肝臟脂代謝關(guān)鍵基因和炎癥因子的mRNA水平，蛋白芯片方法檢測肝臟炎癥因子的蛋白水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測各組肝臟M1型KCs（M1KCs）所占比例。在體外實(shí)驗(yàn)中，分別用BPA（10μM）和LPS（100ng/ml）干預(yù)KCs24h后，檢測M1KCs含量及炎癥因子水平。進(jìn)一步用BPA和LPS處理KCs的上清干

3、預(yù)HepG2細(xì)胞，檢測其脂質(zhì)沉積情況。最后用雌激素受體拮抗劑ICI182780（ICI）阻斷BPA的作用，檢測KCs極化水平及炎癥水平。
　　結(jié)果：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中：1、不同濃度BPA處理后，小鼠肝臟TG含量有不同程度增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），油紅O染色結(jié)果與TG結(jié)果一致。2、定量PCR結(jié)果提示與對照組相比，肝臟脂質(zhì)合成相關(guān)基因SREBP1、FAS表達(dá)增加（p<0.05），脂質(zhì)氧化相關(guān)基因PPARα表達(dá)下降（p<0.05

4、），脂質(zhì)分泌相關(guān)基因MTP表達(dá)下降（p<0.05），脂質(zhì)分解相關(guān)基因 ATGL表達(dá)降低（p<0.05），且肝臟炎癥因子 TNFα、IL-1β、IL-6和MCP-1表達(dá)水平升高（p<0.05）。蛋白芯片結(jié)果與PCR結(jié)果一致。3、流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，不同濃度BPA處理后肝臟M1KCs比例增加（p<0.05）。體外實(shí)驗(yàn)中：1、與對照組相比，BPA處理組M1KCs比例增加（p<0.05），炎癥因子水平表達(dá)升高（p<0.05）。2、采用 BPA處

5、理 KCs后的上清干預(yù) HepG2細(xì)胞，與對照組上清干預(yù)相比，前者HepG2細(xì)胞內(nèi)TG含量明顯增加（p<0.05），油紅O染色結(jié)果與TG結(jié)果一致，脂質(zhì)合成相關(guān)基因SREBP1、FAS和ACC的mRNA水平明顯升高（p<0.05），脂質(zhì)攝取相關(guān)基因 CD36的 mRNA水平明顯升高（p<0.05），脂質(zhì)氧化相關(guān)基因PPARα的mRNA水平明顯下降（p<0.05）。3、與BPA處理組相比，ICI處理后M1KCs比例下降（p<0.05），KC