ADAMTS2和ADAMTS4基因?qū)εＧ绑w脂肪細胞分化及脂質(zhì)沉積的影響_3065.pdf

1、脂肪組織對機體能量代謝和平衡具有重要作用，同時對動物的肉質(zhì)產(chǎn)生很大影響。牛肉的嫩度、風(fēng)味和多汁性主要受肌內(nèi)脂肪含量的影響。脂肪細胞是由前體脂肪細胞分化而來的，此過程受激素和生長因子的調(diào)控，這些激素或生長因子的改變會影響前體脂肪細胞的分化。研究表明，ADAMTS2基因是原膠原轉(zhuǎn)變成膠原過程的剪切酶，它通過對膠原蛋白的生物合成調(diào)控脂質(zhì)的沉積。ADAMTS4基因是牛肉形成大理石紋狀的重要基因之一。由于 ADAMTS2和 ADAMTS4基因都能

2、對脂肪生成進行調(diào)控，從而推測 ADAMTS2和 ADAMTS4基因的表達與前體脂肪細胞分化和肌肉內(nèi)脂肪的沉積有關(guān)。因此，本文以牛前體脂肪細胞為研究對象，分析 ADAMTS2或 ADAMTS4基因?qū)χ|(zhì)沉積的影響，來獲得ADAMTS2和ADAMTS4基因在牛前體脂肪細胞分化過程中的作用。
　　本研究首先采取犢牛皮下脂肪組織進行體外分離和培養(yǎng)。其次將合成的siRNA通過 lipo-2000轉(zhuǎn)染至前體脂肪細胞中，特異性敲減 ADAMTS

3、2和ADAMTS4基因的表達，通過 qRT-PCR方法檢測與脂肪細胞分化相關(guān)基因mRNA表達量變化情況，用胰島素等對轉(zhuǎn)染后的細胞進行誘導(dǎo)，通過HE染色、MASSON染色和掃描電鏡方法檢測脂質(zhì)沉積情況，Western-Blot來檢測轉(zhuǎn)染后蛋白表達情況。結(jié)果表明，敲減 ADAMTS2基因后，與脂肪細胞分化相關(guān)基因PPAR、DGAT2、COL1A1、COL3A1、ADAMTS2、ADAMTS4和 Aggrecan的mRNA表達量均降低，而與脂

4、肪細胞分化相關(guān)基因 EBP和 COL2A1的mRNA表達量無明顯變化。敲減ADAMTS4基因后，與脂肪細胞分化相關(guān)基因PPAR、DGAT2、COL3A1、ADAMTS2、ADAMTS4和 Aggrecan的mRNA表達量均降低，而與脂肪細胞分化相關(guān)基因COL1A1、EBP和COL2A1基因mRNA表達量無明顯變化。敲減 ADAMTS2或 ADAMTS4基因并經(jīng)過誘導(dǎo)后，實驗組脂質(zhì)量明顯比對照組少。Western-Blot分析表明， AD