Pelo條件性基因敲除胚胎干細(xì)胞株的建立.pdf

1、Pelo基因在精子發(fā)生、細(xì)胞周期、減數(shù)分裂以及mRNA降解中有重要的功能，但具體機(jī)制還并不是非常清楚。Pelo敲除的小鼠是胚胎致死的，酵母中Pelo的同源物Dom34敲除的酵母孢子生成也明顯的受到影響，果蠅同源基因pelota突變導(dǎo)致果蠅的精子和卵子發(fā)生的缺陷，這些表型揭示Pelo可能調(diào)控發(fā)育過程中細(xì)胞的有絲分裂，但沒有直接證據(jù)，具體機(jī)制也不明確。
　　 組織特異性的基因條件性敲除技術(shù)使目的基因的敲除在區(qū)域上可人為控制，避免了死

2、胎或動(dòng)物出生后不久即死亡等現(xiàn)象的出現(xiàn)。該技術(shù)一般以Cre/LoxP系統(tǒng)為基礎(chǔ)，Cre重組酶在特定的細(xì)胞類型中表達(dá)，介導(dǎo)相應(yīng)細(xì)胞中兩個(gè)Loxp修飾位點(diǎn)間基因的敲除。Pelo基因條件性敲除小鼠將為人們研究該基因提供了一個(gè)很好的平臺(tái)與動(dòng)物模型。
　　 本論文采用經(jīng)典的同源重組方法建立小鼠Pelo基因條件性敲除胚胎干細(xì)胞。在構(gòu)建條件性敲除載體時(shí)，選擇新霉素抗性基因Neo作為正篩選標(biāo)記，白喉毒素基因DT為負(fù)篩選標(biāo)記。敲除載體基因的兩端各插