解決人胚胎干細胞免疫排斥的方法研究——人胚胎干細胞建庫與孤雌胚胎干細胞的建立.pdf

1、人胚胎干細胞(Human Embryonic Stem Cells,hESCs)是從囊胚內(nèi)細胞團(Inner Cell Mass,ICM)分離得到,能夠在體外無限增殖并且保持核型穩(wěn)定,在特定的誘導(dǎo)條件下還可以向三個胚層的任何細胞類型分化。因此,hESCs不僅是研究人類胚胎發(fā)育的最佳模型,也是未來再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用上極富前景的種子細胞來源。但是hESCs及其分化后的功能細胞表達主要組織相容性抗原(MajiorHistocompatibility

2、 Complex,MHC),移植到宿主體內(nèi)后可能因MHC不相容而刺激機體引起免疫排斥反應(yīng),導(dǎo)致移植治療失敗,這將成為hESCs未來臨床應(yīng)用的主要挑戰(zhàn)之一。因此,要實現(xiàn)hESCs及其功能產(chǎn)物安全應(yīng)用的關(guān)鍵之一就是如何解決免疫排斥問題。本研究主要從兩個方面探討克服干細胞移植的免疫排斥障礙的策略:建立胚胎干細胞庫進行MHC配型；建立孤雌胚胎干細胞系,一方面更容易得到HLA純合的胚胎干細胞系從而提高干細胞庫的MHC配型效率,另一方面也是女性患者

3、自身特異性的多能性干細胞。全文共包括2個部分,分述如下:
　　 目的:探討能否利用質(zhì)差或者異常受精的胚胎建立胚胎干細胞庫,以及建立的胚胎干細胞庫用于干細胞移植時HLA匹配的可行性。
　　 方法:利用體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療中的廢棄胚胎建立人類胚胎干細胞庫,包括:異常原核的胚胎、受精后第三天觀察質(zhì)量較差的胚胎、植入前遺傳學(xué)診斷異常(PGD)的胚胎。對建立的胚胎干細胞系進行細致全面的特性鑒定以及HLA和ABO基

4、因分型檢測。然后與中華骨髓庫湖南分庫中隨機選擇的5236名正常人群進行HLA匹配分析。
　　 結(jié)果:共采用692枚囊胚,建立了188個hESCs系,這些細胞系均具有胚胎干細胞的典型特征,其中153(81.4％)株具有正常二倍體核型。具有二倍體HLA基因型的174株hESCs系與5236名假想患者進行了HLA配型分析,結(jié)果表明:這些hESCs系能夠為24.94％-56.26％的假想患者提供良好的HLA匹配,并且匹配率的高低與民族差

5、異無關(guān)。此外,8個HLA純合型hESCs系貢獻了細胞庫不同HLA匹配水平上50-80％的匹配效率。
　　 結(jié)論:利用臨床廢棄胚胎能夠建立人胚胎干細胞庫,并且能夠具有較大的HLA配型價值,為解決干細胞移植的免疫排斥問題提供了一個良好的策略。
　　 目的:通過孤雌激活的方法建立患者特異性胚胎干細胞系,并與正常受精來源的胚胎干細胞進行生物學(xué)特性的比較研究,探討孤雌胚胎干細胞是否與正常受精胚胎干細胞一樣具有巨大的臨床應(yīng)用前景。<

6、br>　　 方法:利用人工孤雌激活的胚胎以及IVF-ET過程中自然孤雌激活的1PN胚胎建立孤雌胚胎干細胞(Parthenogenetic embryonic stem cells,pESCs)系,對pESCs系進行細致全面的干細胞特性鑒定。并從三個方面對pESCs系與正常受精hESCs系進行比較研究,包括:印記基因的表達、全基因組范圍內(nèi)基因表達差異的分析、全基因組SNP的分布特點以及三個胚層主要器官發(fā)育關(guān)鍵基因的表達對比分析。

7、　　 結(jié)果:pESCs僅表達母源性印記基因,父源性印記基因沉默,而正常受精hESCs同時表達父源和母源印記基因。在全基因組SNP分布方面,自然激活孤雌胚胎來源的chHES-32表現(xiàn)為絕大多數(shù)位點純合,人工激活孤雌胚胎來源的chHES-69表現(xiàn)為大片段的純合與雜合并存,而正常受精胚胎的chHES-8和chHES-10表現(xiàn)為絕大多數(shù)位點雜合。將pESCs和正常hESCs制備EB,體外自發(fā)分化21天后,通過RT-PCR.以及Real-tim