HIF-1α及EPO在急性一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病大鼠海馬區(qū)表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)建立急性CO中毒遲發(fā)型腦病(DEACMP)大鼠模型，觀察HIF-1α及EPO在相應(yīng)動(dòng)物模型中的表達(dá)變化，探討HIF-1α及EPO在DEACMP發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:78只健康雄性成年SD大鼠（SPF級(jí)），體重在240～280g之間，隨機(jī)分為三組:空白對(duì)照組（BC組）18只、空氣對(duì)照組（AC組）30只、急性一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病組（CO組）30只。其中CO組采用腹腔注射法建立DEACMP大鼠模型，AC組采用腹腔注射

2、法注射等量空氣，BC組不進(jìn)行任何手術(shù)操作。按中毒后1d、3d、7d、14d、21d、28d六個(gè)時(shí)間點(diǎn)將三個(gè)組各分為6個(gè)亞組，其中CO組和AC組每個(gè)亞組5只大鼠，BC組每個(gè)亞組3只大鼠。觀察大鼠急性CO中毒表現(xiàn)和大鼠動(dòng)脈血COHb濃度及中毒后期運(yùn)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠認(rèn)知行為學(xué)改變。各組大鼠的腦組織切片均應(yīng)用HE染色觀察大鼠海馬區(qū)病理變化，用TUNEL染色檢測(cè)海馬區(qū)錐體細(xì)胞凋亡情況，應(yīng)用免疫組化染色檢測(cè)海馬區(qū)HIF-1α、EPO

3、蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:1、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果:CO組大鼠在染毒后出現(xiàn)平均逃避潛伏期延長(zhǎng)，且在染毒后14d、21d及28d時(shí)，CO組較BC組和AC組比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。染毒后CO組大鼠在第Ⅳ象限運(yùn)動(dòng)時(shí)間有縮短趨勢(shì)，且染毒14d及染毒28d時(shí)，CO組較BC組及AC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。染毒后CO組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)有降低趨勢(shì)，染毒28d時(shí)，CO組穿越平臺(tái)次數(shù)較其余兩組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義(P＜0.05)。2、HE染色:CO組大鼠在急性CO中毒后出現(xiàn)海馬區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)目減少、細(xì)胞排列松散、細(xì)胞水腫、核固縮、核碎裂等病理學(xué)改變。3、TUNEL法檢測(cè): CO組大鼠海馬區(qū)錐體細(xì)胞于染毒3d時(shí)凋亡開(kāi)始增多，7d時(shí)達(dá)到高峰，28d時(shí)仍有少量細(xì)胞凋亡，各時(shí)間點(diǎn)凋亡指數(shù)與BC組及AC組比較，差異具有顯著性（P＜0.01）。4、免疫組化染色結(jié)果:1）HIF-1α蛋白測(cè)定:HIF-1α在BC組及AC組中表達(dá)較少，且各時(shí)間點(diǎn)間差異不具有顯著

5、性，CO組在染毒1d時(shí)出現(xiàn)HIF-1α的表達(dá)升高，3d達(dá)到峰值，28d時(shí)仍有表達(dá)，表達(dá)量明顯高于BC組及AC組，差異具有顯著性（P＜0.01）;2）EPO蛋白測(cè)定:在BC組及AC組中有少量表達(dá)，且各時(shí)間點(diǎn)間差異不具有顯著性，CO組在染毒1d時(shí)明顯升高，3d為高峰，7d時(shí)下降，染毒1d、3d、7d、14d時(shí)CO組較BC組與AC組差異具有顯著性(P＜0.01)。
　　結(jié)論:1.腹腔注射CO法制作DEACMP大鼠模型，操作簡(jiǎn)單，是研究D