綿羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白的表達(dá)及其單克隆抗體的制備.pdf

1、綿羊肺腺瘤病(sheep pulmonary adenomatosis,SPA)是由β-反轉(zhuǎn)錄病毒屬，綿羊肺腺瘤病病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的一種肺腫瘤性疾病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為B類傳染病。 為了進(jìn)一步研究JSRV的致病機(jī)制及建立快速診斷SPA的方法，本研究將本室保存的重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-SU轉(zhuǎn)化E.coli BL21，經(jīng)表達(dá)純化后作為免疫原，免疫6-8周齡BALB

2、/c小鼠，運(yùn)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)將其脾細(xì)胞與SP2/O骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。運(yùn)用間接ELISA方法，以純化后的pGEX-4T-1-SU重組蛋白及表達(dá)載體pGEX-4T-1標(biāo)簽蛋白GST為檢測(cè)抗原同時(shí)對(duì)雜交瘤上清進(jìn)行初步篩選，得到三株針對(duì)目的蛋白的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1D6、383、3D6。 為了得到針對(duì)天然蛋白的單克隆抗體，以重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-SU為模板，克隆構(gòu)建SU基因的重組真核表達(dá)載體SU-HA-pcDNA3.1

3、(+)，并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染使其在真核A-549細(xì)胞中得以表達(dá)，得到接近天然蛋白的真核表達(dá)蛋白。以此為檢測(cè)抗原，經(jīng)間接免疫熒光法對(duì)所得三株陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行第二次檢測(cè)，結(jié)果顯示1D6、383、3D6均為陽(yáng)性。因此說明本實(shí)驗(yàn)最終獲得了3株能夠識(shí)別SU天然蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞，并已成功地建立了JSRV-NM株SU蛋白的具有很好的特異性及穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系。本項(xiàng)研究為今后建立更為靈敏的檢測(cè)SPA病原的特異性診斷方法，對(duì)SPA發(fā)