Leptin對(duì)脂肪細(xì)胞分化中perilipin、ADRP和TIP47表達(dá)的調(diào)控及其機(jī)理的初步研究.pdf

1、脂肪組織是動(dòng)物機(jī)體最主要的儲(chǔ)能組織，當(dāng)有機(jī)體缺乏能量時(shí)，為機(jī)體提供必要的能量。脂肪組織代謝是一個(gè)復(fù)雜而精細(xì)的調(diào)控過程，在此過程中，脂肪生成與脂肪分解都具有不可忽視作用，如脂肪生成相關(guān)酶有FAS、ACC和SCD等；脂肪分解相關(guān)酶有ATGL、HSL和TGH等，另外，對(duì)脂代謝具有分子開關(guān)作用的perilipin及其家族ADRP和TIP47對(duì)脂肪代謝也有重要調(diào)控作用。此外，脂肪細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子(PPARγ、LXR、RXR等)和信號(hào)通路中蛋白質(zhì)相互

2、作用及作用方式也對(duì)脂肪代謝具重要作用。 本試驗(yàn)以1-3日齡仔豬和15日齡SD大鼠為實(shí)驗(yàn)材料，分離培養(yǎng)原代前體脂肪細(xì)胞，通過油紅O染色、半定量RT-PCR技術(shù)及JAK-STAT3、MEK/ERK及PPARγ特異性抑制劑和PPARγ激活劑聯(lián)合Leptin處理的方法，在體外研究了脂滴相關(guān)蛋白和脂肪生成相關(guān)酶的時(shí)序表達(dá)及Leptin對(duì)perilipin、ADRP、TIP47和PPARγ/mRNA表達(dá)的調(diào)控，并初步探討其分子機(jī)制。主要研究

3、結(jié)果如下： 1.利用半定量RT-PCR法檢測(cè)，perilipin在皮下脂肪組織表達(dá)最高，其次是肌肉，在脾、胃、腎、肝和心臟組織均未檢測(cè)到其mRNA表達(dá)； 2.半定量RT-PCR檢測(cè)長白豬和八眉豬皮下脂肪組織中perilipin、ADRP、TIP47、ACCα、LXRα、FAS、SCD、PPARγmRNA的表達(dá)。結(jié)果：八眉豬perilipin、SCDmRNA表達(dá)顯著低于長白豬，八眉豬TIP47、FAS和LXRαmRNA表達(dá)

4、顯著高于長白豬； 3.通過半定量RT-PCR法檢測(cè)原代培養(yǎng)豬脂肪細(xì)胞2、4、6、8、10、12、14d脂滴相關(guān)蛋白和脂肪合成相關(guān)酶mRNA的時(shí)序表達(dá)。結(jié)果，隨著脂肪細(xì)胞分化perilipin、ADRP、TIP47、ACCα、LXRα、FAS和SCDmRNA總體趨勢(shì)是逐漸升高； 4.當(dāng)Leptin處理豬脂肪細(xì)胞3h時(shí)：150nmol/LLeptin處理perilipinmRNA表達(dá)顯著降低，50和100nmol/LLept

5、in處理3hPPARγ，ACCα和FASmRNA表達(dá)顯著降低。當(dāng)Leptin處理豬脂肪細(xì)胞6h時(shí)：50和100nmol/LLeptin處理降低perilipin、SCD、PPARγ、FAS、ACCα和LXRαmRNA表達(dá)，50，100，150nmol/LLeptin處理顯著下調(diào)ADRPmRNA表達(dá)，50nmol/LLeptin處理6hTIP47mRNA表達(dá)下降； 5.通過JAK-STAT3信號(hào)通路的特異性抑制劑AG49020μm

6、ol/ml、MEK信號(hào)通路的特異性抑制劑U012620μmol/ml、PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮(Ros)3μmol/ml和PPARγ抑制劑GW966210μmol/ml分別與50ng/mlleptin共同處理大鼠脂肪細(xì)胞3h，通過RT-PCR檢測(cè)perilipin、ADRP、TIP47和PPARγmRNA的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：AG490抑制50ng/mlLeptin對(duì)大鼠脂肪細(xì)胞perilipinmRNA表達(dá)的抑制作用(P＜0.05)；而P

7、PARγmRNA差異不顯著，暗示Leptin通過JAK-STAT3通路抑制perilipinmRNA的表達(dá)，但是Leptin并不是通過JAK-STAT3通路抑制PPARγmRNA表達(dá)；U0126阻斷MEK/ERK通路加劇Leptin對(duì)體外培養(yǎng)大鼠脂肪細(xì)胞perilipin、ADRP和PPARγmRNA的表達(dá)下調(diào)作用；U0126抑制Leptin對(duì)大鼠脂肪細(xì)胞TIP47mRNA的抑制作用(P＜0.05)，抑制MEK/ERK通路抑制peril