Visfatin與2型糖尿病和肥胖的關(guān)聯(lián)分析及其對(duì)脂肪細(xì)胞分化作用的初步研究.pdf

1、內(nèi)臟脂肪素(visfatin)是新發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)臟脂肪組織高表達(dá)的蛋白,具有類似胰島素功能,并能與胰島素受體結(jié)合,使胰島素受體發(fā)生磷酸化,從而激活胰島素信號(hào)通路中的下游信號(hào)分子.因此,visfatin可能參與2型糖尿病(T2DM)和肥胖癥的發(fā)生過程.為了進(jìn)一步明確visfatin與T2DM及肥胖癥間的聯(lián)系,我們檢測(cè)了241例包括正常對(duì)照、葡萄糖調(diào)節(jié)受損(IGR)和T2DM患者血清中visfatin的水平;分析了14例包括正常對(duì)照、肥胖及肥

2、胖合并Tr2DM患者的人體腹部脂肪組織visfatin基因mRNA的水平;采用470例正常對(duì)照和470例T2DM患者,進(jìn)行visfatin基因5個(gè)SNP位點(diǎn)多態(tài)性與T2DM、肥胖及其相關(guān)指標(biāo)的遺傳關(guān)聯(lián)分析;同時(shí),對(duì)發(fā)現(xiàn)顯著關(guān)聯(lián)結(jié)果的SNP位點(diǎn)通過雙螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)進(jìn)行功能的初步研究. 本研究發(fā)現(xiàn)：1)血清visfatin水平在T2DM、IGR和正常糖耐量個(gè)體間無顯著差異.肥胖個(gè)體visfatin水平顯著小于正常體重個(gè)體(13

3、.66±0.87ng/ml vs.15.46±0.47ng/ml,P=-0.03).在男性中,提示visfatin水平與BMI呈負(fù)相關(guān)(r=0.17 P=0.07),與wHR呈正相關(guān)(r=0.16 P=0.08),統(tǒng)計(jì)均為邊緣顯著. 2)肥胖組及肥胖合并T2DM的人體腹部脂肪組織的 visfatin mRNA 水平高于正常體重對(duì)照組,但差異無統(tǒng)計(jì)顯著性. 3)-1535C/T、rs10953502和rs2058539三S

4、NP位點(diǎn)與血清 visfatin 水平均不關(guān)聯(lián).-1535C/T和 rs4730155位點(diǎn)基因型與 T2DM 相關(guān)聯(lián),-1535C/T位點(diǎn)和 rs4730155位點(diǎn)為CC純合子的個(gè)體患 T2DM 的風(fēng)險(xiǎn)高于其它基因型個(gè)體,其OR值分別為1.37和1.38.在校正血脂指標(biāo)后,該風(fēng)險(xiǎn)因素變得不再顯著.五個(gè)SNP位點(diǎn)的兩個(gè)常見單體型 TCAAT (P=0.003)及CCAAT (P=0.002)與 T2DM 顯著關(guān)聯(lián).另外本研究發(fā)現(xiàn)-1535

5、C/T與血清甘油三酯,rs52058539與總膽固醇和高密度脂蛋白,rs711438與總膽固醇和低密度脂蛋白相關(guān)聯(lián)(P<0.05). 4)連接visfatin基因上游包含-1535C/T位點(diǎn)純合子CC和TT片段的螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)結(jié)果顯示TT純合子的表達(dá)量比CC純合子升高24﹪,表達(dá)差異具統(tǒng)計(jì)顯著性(P=0.001).此結(jié)果提示visfatin基因可能是與T2D 及血脂水平相關(guān)聯(lián)的一個(gè)有效候選基因.Visfatin 基

6、因上游的SNP位點(diǎn)變異可能影響該基因的表達(dá). 近十多年來,人們對(duì)脂肪組織的認(rèn)識(shí)發(fā)生了革命性的改變,脂肪組織不僅僅是一個(gè)惰性的儲(chǔ)存能量的器官,同時(shí)它也是一個(gè)活躍的內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌器官.脂肪細(xì)胞分泌的因子如adiponectin和IGF-1能通過自分泌的作用促進(jìn)脂肪細(xì)胞的自身分化.在3T3-L1由前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的進(jìn)程中,visfatin蛋白表達(dá)的逐步增多提示其可能作為一個(gè)功能蛋白參與脂肪細(xì)胞的分化.我們利用3T3-L

7、1 細(xì)胞株作為脂肪細(xì)胞體外分化的模型,通過重組蛋白干預(yù)和RNA干擾(RNAi)的方法檢測(cè)visfatin對(duì)脂肪細(xì)胞分化的影響.結(jié)果發(fā)現(xiàn)低劑量的visfatin能輕微促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化,而RNAi能部分抑制脂肪細(xì)胞的成熟和脂滴的形成,并使與成熟脂肪細(xì)胞相關(guān)的一些蛋白表達(dá)發(fā)生改變.在3T3-L1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制階段降低visfatin的表達(dá),能使誘導(dǎo)分化細(xì)胞的C/EBP α、PPAR-γ、LPL、aP2和adiponectin的mRNA.表達(dá)量