C57BL-6鼠內(nèi)耳形態(tài)發(fā)育及相關(guān)蛋白表達的比較研究.pdf

1、目的：為了深入了解C57BL/6小鼠內(nèi)耳形態(tài)發(fā)育的一般規(guī)律及內(nèi)耳發(fā)育過程中相關(guān)蛋白的表達情況。 方法： 本實驗以C57BL/6小鼠為實驗對象。對E8-Da的C57BL/6小鼠的內(nèi)耳發(fā)育時間段的內(nèi)耳標本進行冰凍切片處理。運用HE常規(guī)染色、三維重建技術(shù)、掃描電鏡和基因蛋白表達免疫組織化學分析技術(shù)進行研究分析。 結(jié)果： ①HE常規(guī)染色大體觀上了解了C57BL/6小鼠內(nèi)耳形態(tài)發(fā)育E8-Da期間的一般規(guī)律并且獲得了

2、E13的三維立體圖像；②獲得了各種聽功能密切相關(guān)的結(jié)構(gòu)的成熟時間點，基底膜(D10)、鼓階前庭階(D4)、螺旋器隧道(D12)、內(nèi)螺旋溝(D10)、蓋膜(D10)、毛細胞(D12)、螺旋神經(jīng)元(D12)和蝸軸纖維(D12-D14)；③完成了前神經(jīng)決定蛋白、神經(jīng)分化蛋白、神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)元特異性蛋白等內(nèi)耳發(fā)育相關(guān)的蛋白的表達時限表并詳細觀察了其在內(nèi)耳各個部位表達隨發(fā)育變化的特點；④calbindin在E16以后的螺旋神經(jīng)元沒有表達，但是

3、在scarpa神經(jīng)元持續(xù)表達。而NCS1在兩者中都有表達：⑤Calbindin在E19-D22期間的毛細胞表達，但是在成年沒有表達，并且內(nèi)毛細胞出現(xiàn)表達較外毛細胞早，而表達消失較外毛細胞晚。MyosinⅦa在D1-D7的毛細胞清晰表達，但是D12表達漸弱，尤其是外毛細胞。⑥在C57BL/6鼠內(nèi)耳發(fā)育過程中血管紋處有GAP-43，Peripherin，Neurofilament，BDNF，NT3和TUJ-1的表達；⑦神經(jīng)元干細胞的標記物I

4、sletl的表達從E16螺旋神經(jīng)元所在的位置有大量的細胞核表達開始，一直到D7表達開始減弱，到D12表達的方式變?yōu)轭w粒樣表達。 結(jié)論： ①聽功能相關(guān)的重要結(jié)構(gòu)的成熟時間，提示C57BL/6小鼠的耳蝸要發(fā)揮聽覺功能應(yīng)該在D12和D14之間。②內(nèi)耳發(fā)育過程中位于螺旋器隧道下的管腔結(jié)構(gòu)不是螺旋血管，該結(jié)構(gòu)的作用未明，可能是一個與螺旋器發(fā)育密切相關(guān)的發(fā)育期結(jié)構(gòu)。③螺旋神經(jīng)元與scarpa神經(jīng)元在鈣離子相關(guān)的生命活動中存在差異。④

5、Calbindin在毛細胞表達有時限性，可作為新生毛細胞的特異性標志物。⑤TUJ-1 對內(nèi)外毛細胞的傳入和傳出神經(jīng)纖維染色，并推測外毛細胞中傳入纖維發(fā)育比傳出神經(jīng)纖維遲。Peripherin對傳入神經(jīng)纖維染色而neurofilament可能對傳出神經(jīng)纖維染色。⑥血管紋中存在神經(jīng)來源的細胞組織，可能是黑素細胞(暗細胞)。⑦在C57BL/6小鼠的內(nèi)耳中，D7前的螺旋神經(jīng)元仍然具有神經(jīng)元干細胞的特性。⑧TUJ-1在鳥類和C57BL/6鼠內(nèi)外毛