NKT細(xì)胞對C57BL-6小鼠胚胎著床和發(fā)育的影響及其免疫機制的初步研究.pdf

1、目的：為了探究NKT細(xì)胞對C57BL/6小鼠胚胎著床和發(fā)育的影響及其可能的免疫機制，通過刺激NKT細(xì)胞增殖活化，觀察胚胎著床及發(fā)育情況，同時檢測其分泌的細(xì)胞因子IL-10和TNF-α變化，以分析其在母體子宮內(nèi)膜免疫微環(huán)境中的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：⑴在小鼠胚胎著床前后的不同時間腹腔注射不同濃度的抗原KRN7000刺激NKT細(xì)胞活化，整體觀察胚胎著床和發(fā)育情況。⑵在小鼠胚胎著床前后的不同時間腹腔注射不同濃度的抗原KRN7000刺激

2、NKT細(xì)胞活化，用RT-PCR法半定量檢測NKT細(xì)胞活化后子宮蛻膜組織中IL-10和TNF-α mRNA的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：①分別給妊娠D3(著床前一天)和妊娠D6(著床后)小鼠腹腔注射不同濃度(0，1.25，2.5，5μg/ml)的抗原KRN7000每只0.4ml，于妊娠D8觀察著床胚胎數(shù)及其發(fā)育情況，結(jié)果顯示于妊娠D3給藥后，各實驗組胚胎著床數(shù)減少，與對照組相比存在顯著差異(P<0.05)，著床后的胚胎發(fā)育不良，但不同實

3、驗組之間不存在顯著差異(P>0.05)。于妊娠D6給藥后，各實驗組均誘導(dǎo)胚胎流產(chǎn)，胚胎吸收率均達(dá)100％。②分別給妊娠D3和妊娠D6小鼠腹腔注射不同濃度(0，1.25，2.5，5μg/ml)的抗原KRN7000每只0.4ml，用RT-PCR技術(shù)檢測給藥后一天不同實驗組子宮蛻膜組織中IL-10的mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示妊娠D4(著床日)小鼠中，各實驗組子宮蛻膜組織中IL-10的mRNA表達(dá)均明顯低于對照組，差異有顯著性(P<0.05)；而不

4、同實驗組間IL-10的mRNA表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)。妊娠D7天小鼠中，各實驗組子宮蛻膜組織中IL-10的mRNA表達(dá)也明顯低于對照組，差異有顯著性(P<0.05)；而不同實驗組間IL-10的mRNA表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)。③分別給妊娠D3和妊娠D6小鼠腹腔注射不同濃度(0，1.25，2.5，5μg/ml)的抗原KRN7000每只0.4ml，用RT-PCR技術(shù)檢測給藥后一天不同實驗組子宮蛻膜組織中TNF-α的mRNA

5、表達(dá)。結(jié)果顯示妊娠D4，實驗組各組中TNF-α的mRNA表達(dá)明顯低于對照組，差異有顯著性(P<0.05)；而不同實驗組間TNF-α的mRNA表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)；妊娠D7小鼠中，各實驗組TNF-α的mRNA表達(dá)高于對照組，但1.25μg/ml和2.5μg/ml濃度組與對照組比較差異有顯著性(P<0.05)，而5μg/ml濃度組與與對照組比較差異無顯著性(P>0.05)。④通過分析妊娠D4和妊娠D7小鼠的子宮蛻膜TNF-α/I

6、L-10的相對光密度比值，結(jié)果顯示在妊娠D4小鼠中各實驗組TNF-α/IL-10的相對光密度比值高于對照組，1.25μg/ml和5μg/ml濃度組與對照組比較差異有顯著性(P<0.05)，而2.5μg/ml濃度組與對照組比較差異無顯著性(P>0.05)，5μg/ml濃度組比值高于其他三組，差異具有顯著性(P<0.05)。在妊娠D7小鼠各實驗組TNF-α/IL-10的相對光密度比值顯著高于對照組(P<0.05)，但各實驗組之間無顯著性差異