建立C57BL-6小鼠實驗性自身免疫性葡萄膜炎模型.pdf

1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文論文題目：答辯委員會主席：答辯委員會成員：論文答辯日期：川。西、＼cl2溫州醫(yī)學院碩士學位論文中文摘要目的采用人工合成的視黃醇類結(jié)合蛋白(InterphotoreceptorRetinoidBindingProtein，IRBP)和百日咳桿菌的毒素(PurifiedBordetellapertussistoxin，PTX)，建立C57BL／6小鼠的自身免疫性葡萄膜炎模型(experimentalautoimmune

2、uveoretinitis，EAU)，為腺苷A2A基因敲除對小鼠自身免疫性葡萄炎影響研究建立模型。方法1實驗動物：選雌性C57BL／6小鼠43只，612周齡鼠(體重20—259)，分為5批次，每批均隨機選用l~2只小鼠作為陰性對照組。2視黃醇類結(jié)合蛋白(IIlte叩hotoreceptorRetinoidBindingProtein，IRBP)序列GPTHLFQPSLVLDMAKVLLD，由人工合成。3建模操作：小鼠全麻后，研究組：取I

3、RBP與完全弗氏佐劑(Freundscompleteadjuvant，rCA)按1：1體積混合得到混合液，分別在小鼠的頸部，尾根部，雙胸側(cè)部4個點，皮內(nèi)注射300pg，然后腹腔注射不同劑量的純化的百日咳桿菌的毒素(PTX)。陰性對照組小鼠，同樣四個位點皮內(nèi)，腹腔注射PBS。注射2周開始觀察小鼠眼底、眼前節(jié)炎癥反應(yīng)并記錄。注射第21天處死小鼠，取眼球。固定、石蠟包埋、視網(wǎng)膜組織切片、HE染色。結(jié)果1實驗鼠34只。實驗21天時仍然存活30只

4、，眼球取樣60只眼，陰性對照9只，死亡小鼠中，PTX500ng組小鼠死亡4只，PTX200ng組350ng組小鼠死亡0只。2HE上建模成功的特征：視網(wǎng)膜層次紊亂、增厚，視網(wǎng)膜外核層和或內(nèi)核層皺褶，視網(wǎng)膜各層炎癥細胞浸潤。3確定EAU建模成功35個眼球，占比583％。其中輕度(05分)18只，中度(12分)13只，重度(3—4分)4只。PTX500ng組18只眼，評分在05分或以上16R，成模率889％；PTX200ng寶H，成模率僅為3