YZK復(fù)方治療病毒性乙型肝炎的藥理學(xué)研究.pdf

1、臨床上化學(xué)藥物抗病毒治療的基礎(chǔ)是抑制嗜肝DNA病毒復(fù)制，抑制復(fù)制可減少模板cccDNA的形成，同時(shí)抑制感染細(xì)胞中靶抗原的表達(dá)，以緩解炎癥應(yīng)答。清除肝細(xì)胞核內(nèi)cccDNA是對(duì)慢性乙肝抗病毒治療取得持續(xù)療效的關(guān)鍵。目前聯(lián)合用藥包括聯(lián)合應(yīng)用抗病毒化合物、免疫調(diào)節(jié)、治療用疫苗，以及基因靶向療法。 中藥復(fù)方治療肝炎在臨床上應(yīng)用廣泛，研究表明中藥復(fù)方在抗病毒復(fù)制、調(diào)節(jié)免疫功能、減輕肝細(xì)胞損傷、改善肝功能，尤其是抗肝纖維化、防治早期肝硬變多環(huán)

2、節(jié)都能起到作用，綜合療效優(yōu)于單純的西藥。 茵梔苦復(fù)方是在茵陳蒿湯基礎(chǔ)上化裁而得，由茵陳、梔子和苦參的三味中藥按比例混合而成。本研究借助2.2.15細(xì)胞模型和鴨乙肝動(dòng)物模型，對(duì)茵梔苦復(fù)方抗肝炎復(fù)方藥效進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)，并對(duì)復(fù)方抗肝炎的機(jī)理做了初步探討，以拉米呋啶為陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)行藥物的細(xì)胞毒性試驗(yàn)及對(duì)HBsAR、HBeAg抑制試驗(yàn)，建立了用SyBrgreenI熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法細(xì)胞HBVDNA的方法，運(yùn)用鴨乙肝模型觀察了中藥復(fù)方在

3、體內(nèi)對(duì)DHBV-DNA復(fù)制的抑制作用，為正確評(píng)價(jià)藥效建立了簡(jiǎn)便價(jià)廉的操作方法。 本研究中觀察了茵梔苦復(fù)方對(duì)2.2.15細(xì)胞上清HBsAg和HBeAg的表達(dá)量和對(duì)HBVDNA的抑制情況。在毒性實(shí)驗(yàn)中，茵梔苦復(fù)方對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞的無(wú)毒濃度TC0為200mg/ml，TC50為358.5mg/ml。 茵梔苦復(fù)方及其組分對(duì)2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的HBsAg都存在著不同程度的抑制作用，并呈現(xiàn)基本一致的規(guī)律，抑制率從第

4、一天開(kāi)始逐漸攀升，于第6天達(dá)到最高值，并由此開(kāi)始下降，其中以復(fù)方高劑量為最高，與3TC比較差異顯著。從抑制率的變化趨勢(shì)來(lái)看，復(fù)方高劑量下降最為緩慢，藥效時(shí)間維持長(zhǎng)久。茵梔苦復(fù)方及其組分對(duì)2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的HBeAg的抑制作用，只有復(fù)方高劑量呈現(xiàn)比較清晰的規(guī)律，與抑制HBsAg的變化規(guī)律基本一致。其它藥物的抑制率都在20％-30％左右波動(dòng)，藥效不顯著，而且實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不穩(wěn)定.從抑制率的變化趨勢(shì)來(lái)看，復(fù)方高劑量下降較快，藥效時(shí)間維持

5、較短。結(jié)果顯示復(fù)方對(duì)HBsAg的抑制作用要強(qiáng)于HBeAg。 含藥血清對(duì)2.2.15細(xì)胞上清的HBsAg抑制率的影響，其曲線顯示出的規(guī)律也為第六天達(dá)到最高峰，此后逐漸下降，但是下降的趨勢(shì)明顯比單味藥物作用的要緩，在第12天仍然可測(cè)到較高的水平。兩種藥物血清對(duì)HBsAg的影響無(wú)明顯差異。含藥血清對(duì)2.2.15細(xì)胞上清分泌的HBeAg抑制率的影響，其曲線顯示出的規(guī)律與HBsAg有所不同，為第六天達(dá)到最高峰，但此后無(wú)明顯下降，到第12天

6、，抑制率還維持在較高、較穩(wěn)定的水平上。兩種藥物血清對(duì)HBeAg的影響無(wú)明顯差異。 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，高劑量茵梔苦復(fù)方在體外的多項(xiàng)指標(biāo)方面都發(fā)揮著顯著的作用，與細(xì)胞對(duì)照組差異顯著，茵梔苦復(fù)方對(duì)病毒DNA合成的抑制作用隨著劑量的增大而增強(qiáng)，呈量效關(guān)系。茵梔苦復(fù)方高劑量與拉米呋啶的抑制率接近，拉米呋啶和復(fù)方高劑量組比細(xì)胞對(duì)照的HBV拷貝數(shù)少了一個(gè)指數(shù)級(jí)，療效顯著。復(fù)方的組分中苦參提取物的抑制效果最強(qiáng)，藥效強(qiáng)度在復(fù)方高、低劑量之間，而

7、茵陳提取物未顯示出對(duì)HBVDNA的抑制作用，由此可以推斷苦參是茵梔苦復(fù)方抗HBVDNA中是起作用的重要組分，同時(shí)可以看出復(fù)方的療效優(yōu)于三個(gè)單一組分(茵陳蒿提取物、梔子提取物和苦參提取物)的藥效，但復(fù)方和各組分之間藥效并不是簡(jiǎn)單的疊加關(guān)系，復(fù)方無(wú)論高、低劑量藥效強(qiáng)度都要優(yōu)于單味藥。 本研究也用熒光定量方法檢測(cè)了含藥血清對(duì)HBVDNA的抑制作用，觀察茵梔苦復(fù)方在體內(nèi)代謝后的含藥血清對(duì)細(xì)胞的病毒復(fù)制的影響，從結(jié)果可以看出，以未含藥物的

8、陰性血清作為細(xì)胞對(duì)照，含藥血清對(duì)HBV-DNA未顯示明顯的抑制作用。其抑制率均不超過(guò)20％。 本研究運(yùn)用鴨乙肝模型觀察了中藥復(fù)方在體內(nèi)對(duì)DHBV-DNA復(fù)制的抑制作用。通過(guò)口服、腹腔注射兩種給藥途徑，分為病毒組、3T組、低、中、高劑量組，在給藥前(T0)，給藥第5天(T5)、第10天(T10)和停藥后第3天(P3)，計(jì)算抑制率，將以不同給藥時(shí)間抑制率結(jié)果作為重復(fù)測(cè)量變量進(jìn)行分析，結(jié)果表明不同給藥方式之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，腹腔注射效果

9、好于口服給藥；給藥第5天抑制率與第10天抑制率之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而停藥后3天抑制率與給藥第5天抑制率之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同藥物組之間陰性對(duì)照組和其他各組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高劑量組、中劑量組、低劑量組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而陽(yáng)性對(duì)照組除了和高劑量組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，與其他各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從以上結(jié)果可以看出復(fù)方藥物治療組對(duì)病毒的抑制是有效果的，腹腔注射效果好于口服給藥，其中高劑量組治療效果和陽(yáng)性對(duì)照組最接近，但與陽(yáng)性對(duì)照組的效果仍有