紅斑狼瘡患者高遷移率族蛋白-1的表達(dá)及其對下游炎癥因子調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的: 研究紅斑狼瘡患者皮損中高遷移率族蛋白-1(HMGB-1)的表達(dá)情況，初步探討其在紅斑狼瘡發(fā)病機制中的作用。 方法: 采用免疫組織化學(xué)及Western-blot法檢測正常人皮膚、DLE患者及SLE患者皮損組織中HMGB-1表達(dá)。 結(jié)果: 正常人皮膚組織HMGB-1主要表達(dá)于表皮角質(zhì)形成細(xì)胞胞核中。DLE患者皮損區(qū)HMGB-1主要表達(dá)于真皮浸潤的單個核細(xì)胞中，表皮角質(zhì)形成細(xì)胞HMGB-1仍為核

2、表達(dá)，但陽性表達(dá)細(xì)胞的百分比較正常人減少(t=11.315，P<0.01)；非皮損區(qū)HMGB-1表達(dá)的部位仍為細(xì)胞核表達(dá)且陽性細(xì)胞百分比與正常人相比無顯著差異(P>0.05)，同時HMGB-1蛋白表達(dá)總量與正常人比較無顯著差異(t=0.681，P>0.05)；SLE患者皮損中除真皮浸潤的單個核細(xì)胞仍為陽性表達(dá)外，皮損區(qū)細(xì)胞外及表皮細(xì)胞胞漿出現(xiàn)HMGB-1陽性表達(dá)，而表皮HMGB-1核表達(dá)陽性細(xì)胞的百分比低于DLE患者(t=6.821，P

3、<0.01)，非皮損區(qū)HMGB-1的表達(dá)部位及陽性細(xì)胞百分比與正常人相比仍無顯著差異(P>0.05)：HMGB-1表達(dá)總量分別較正常人及DLE患者顯著上調(diào)(t=15.494，P<0.01；t=13.221，P<0.01)，且其表達(dá)強度與SLEDAI及尿蛋白升高相關(guān)(r=0.565，P<0.01；OR=1.027，P<0.05)。 結(jié)論: 紅斑狼瘡患者皮損中HMGB-1表達(dá)部位及表達(dá)水平呈不同程度改變，存在亞細(xì)胞移位且表達(dá)

4、強度增強，同時SLE與DLE皮損HMGB-1表達(dá)部位及表達(dá)水平存在差異，提示HMGB-1可能參與紅斑狼瘡的炎癥機制。 目的: 觀察SLE患者外周血單個核細(xì)胞中HMGB-1表達(dá)水平和脂多糖干預(yù)下HMGB-1的細(xì)胞內(nèi)移位的特點，探討HMGB-1在SLE發(fā)病機制中的作用。 方法: 采用western-blot方法檢測39例SLE患者和39例正常對照者血清中HMGB-1的表達(dá)水平。然后分別在兩組PBMCs培養(yǎng)液中

5、加入200ng/ml脂多糖，采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測并比較刺激前后SLE患者組與正常對照組HMGB-lmRNA的表達(dá)水平。同時用細(xì)胞免疫熒光法動態(tài)觀察脂多糖刺激后不同時間點HMGB-1細(xì)胞內(nèi)移位的變化。采用sandwich ELISA法觀察脂多糖誘導(dǎo)PBMCs分泌HMGB-1的變化特點。 結(jié)果: SLE患者組血清中HMGB-1的濃度顯著高于正常對照組(P<0.01)，且其新鮮分離的外周血單個核細(xì)胞中HMGB-1

6、mRNA的表達(dá)水平上調(diào)。LPS刺激前后SLE患者組和正常對照組PBMCs中HMGB-1 mRNA的表達(dá)均未發(fā)生改變(P>0.05)。LPS刺激兩組單個核細(xì)胞內(nèi)HMGB-1由細(xì)胞核至細(xì)胞漿移位的類型和發(fā)生時間一致，且各時間點胞內(nèi)HMGB-1含量在兩組間無差別。LPS誘導(dǎo)HMGB-1的釋放呈時間依賴性增加，其釋放水平在SLE患者尤其是伴有蛋白尿者中顯著增高。 結(jié)論: SLE患者的HMGB-1蛋白及mRNA表達(dá)水平增高，提示

7、HMGB-1可能參與紅斑狼瘡的發(fā)病機制。HMGB-1在SLE患者尤其是伴有蛋白尿患者的炎癥因子刺激局部顯著升高并可能由此導(dǎo)致免疫損傷。 目的: 研究HMGB-1通過對PBMCs產(chǎn)生TNFα和IL-6分泌的作用研究其對下游原炎癥細(xì)胞因子的免疫調(diào)節(jié)作用，進一步探討其在SLE中的發(fā)病機制。 方法: 分離SLE患者和正常對照者的PBMCs，分別加入HMGB-1(1μg/ml)或LPS(lOOng/ml)或不加刺激

8、劑連續(xù)培養(yǎng)不同時間，采用ELISA方法檢測培養(yǎng)上清中各時間點TNFα和IL-6的分泌水平；RT-PCT技術(shù)檢測HMGB-1(1μg/ml)干預(yù)引起的TNFα mRNA表達(dá)的改變。 結(jié)果: LPS或HMGB-1刺激引起SLE患者單個核細(xì)胞釋放TNFα的水平均較正常對照者降低。其中，HMGB-1誘導(dǎo)SLE患者PBMCs持續(xù)分泌低水平的TNFα，而其IL-6的分泌水平較正常組增高且延遲。HMGB-1刺激引起SLE患者PBMC