高遷移率族蛋白1在內(nèi)毒素耐受中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景:高遷移率族蛋白1（HMGB1）生理狀態(tài)下以非組蛋白的形式存在于細(xì)胞核中，可在炎癥反應(yīng)晚期釋放至胞外發(fā)揮炎癥因子的作用。外源性重組HMGB1可以引起內(nèi)毒素耐受。內(nèi)毒素耐受是機(jī)體抑制自身炎癥反應(yīng)過(guò)度發(fā)展的有效手段，表現(xiàn)為抑制TNF-α等促炎因子的表達(dá)而并不抑制IL-10等抑炎因子的表達(dá)。雖然內(nèi)毒素耐受能在一定程度上抑制炎癥反應(yīng)的泛濫，但若任其發(fā)展，便會(huì)削弱機(jī)體的防御能力，增加二次感染甚至死亡的幾率。目前有關(guān)內(nèi)毒素耐受機(jī)制的研究尚無(wú)定論

2、，我們不知道該過(guò)程通過(guò)什么來(lái)介導(dǎo)，是否存在關(guān)鍵的啟動(dòng)因子。
　　目的:研究經(jīng)典內(nèi)毒素耐受（小劑量LPS引起）的發(fā)生機(jī)制，說(shuō)明內(nèi)源性HMGB1在其中不可替代的獨(dú)特作用，并闡明其機(jī)制。
　　方法:課題分為四個(gè)部分。第一章，應(yīng)用重組HMGB1或經(jīng)熱處理的重組HMGB1預(yù)處理小鼠1小時(shí)后，給予其大劑量LPS打擊，ELISA檢測(cè)血清中TNF-α的含量，WB及免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)肝臟中其中IRAK-M的表達(dá);第二章，應(yīng)用小劑量LPS預(yù)

3、處理小鼠24小時(shí)后，給予其大劑量LPS打擊，ELISA檢測(cè)血清中HMGB1的含量，WB檢測(cè)肝臟中HMGB1的表達(dá);應(yīng)用小劑量LPS預(yù)處理RAW264.7細(xì)胞18小時(shí)后，給予其大劑量LPS打擊，免疫熒光染色觀察HMGB1的核-胞漿轉(zhuǎn)移情況;第三章，應(yīng)用小劑量LPS預(yù)處理小鼠，0.5，4和10小時(shí)后分別連續(xù)腹腔注射正丁酸鈉，24小時(shí)后腹腔注射大劑量LPS，RT-PCR檢測(cè)肝臟中TNG-α mRNA的表達(dá)，WB檢測(cè)肝臟中HMGB1的表達(dá)，EL

4、ISA檢測(cè)血清中TNF-α的含量;第四章，應(yīng)用小劑量LPS預(yù)處理小鼠，2，12，22小時(shí)后分別連續(xù)腹腔注射HMGB1中和抗體，24小時(shí)后腹腔注射大劑量LPS，ELISA檢測(cè)血清中TNF-α的含量，WB檢測(cè)肝臟中IRAK-M的表達(dá)，WB檢測(cè)NF-κ B在肝臟胞核中的表達(dá)，EMSA檢測(cè)肝臟中NF-κ B與DNA的結(jié)合能力。
　　結(jié)果:第一章，重組HMGB1預(yù)處理1小時(shí)可以引起內(nèi)毒素耐受，其機(jī)制與上調(diào)負(fù)性調(diào)控蛋白IRAK-M的表達(dá)有關(guān)，